بهينه سازي فرايند فيبريل زايي از آلبومين سرم گاوي با روش جذب سنجي كنگورد

Optimization of bovine serum albumin fibrillation by congored spectrophotometric method for using as nanobiomaterial

سابقه و هدف: رشته هاي آميلوييدي نانو ساختارهايي هستند كه در نتيجه اتصال پپتيدها و پروتيين ها به يكديگر به وجود مي آيند. در سال هاي اخير رشته هاي آميلوييدي به عنوان نانو مواد جديد مورد توجه قرار گرفته اند. از اين منظر، افزايش ميزان آميلوييدي شدن پروتيين ها مي تواند مطلوب باشد. در اين مطالعه فرايند آميلوييدي شدن آلبومين سرم گاوي به عنوان يك پروتيين مدل، بهينه سازي شده است. مواد و روش ها: پروتيين آلبومين سرم گاوي در بافر ميكس سيترات-فسفات با pH هاي مختلف 1 و 2 و 3 و 7/4 و 4/7 قرار گرفته و هر كدام در حمام آب با دماهاي مختلف (از 40-80 درجه سانتيگراد) قرار گرفته و به كمك مگنت هاي كوچك (برنجي) با سرعت 100 دور در دقيقه و براي زمان هاي مختلف 0، 24، 48 و 72 ساعت بهم زده شدند تا رشته هاي پروتيني در هر يك بوجود آيد. سپس ميزان رشته هاي آميلوييدي حاصله به روش جذب سنجي مريي و با استفاده از رنگ كنگورد مورد بررسي قرار گرفت. يافته ها: در اين تحقيق اثر چهار متغير دما، pH، زمان و غلظت پروتيين بر فرايند فيبريل زايي بررسي شده و نتايج حاصله با روش طيف سنجي كنگورد به صورت تغييرات طول موج ماكزيمم (?max) و جذب در طول موج ماكزيمم (A?max) و نيز ميكروسكوپ الكتروني گذاره مورد تاييد قرار گرفت. مشخص شد كه بهترين شرايط تشكيل رشته هاي آميلوييدي در غلظت 5 ميلي گرم بر ميلي ليتر از پروتيين BSA و در pH بافر برابر 3 و پس از 72 ساعت انكوباسيون در دماي 70 درجه سانتيگراد مي باشد. نتيجه گيري: از روش ساده جذب سنجي كنگورد مي توان به عنوان آزمايش اوليه براي تاييد حضور نانو رشته هاي پروتييني استفاده نمود و در اين راستا، ميزان جذب در طول موج ماكزيمم به عنوان يك شاخص موثق معرفي مي شود.

Aim and Background: Amyloids are fibrilar protein structures produced from aggragation of proteins and peptide together. In recent years amyloid fibrils are being noticed as new experimental nanomaterials and from this view the induction of proteins to amyloids could be beneficial. In this study, the fibrillation of bovine serum albumin (BSA) as a model protein is optimized. Materials and Methods: Different pH of 1, 2, 3, 4.7 and 7.4 of Bovine Serum Albumin was prepared in Mixed Citrate–Phosphate buffer and agitated for 0, 24, 48 and 72 hour in 100 RPM in various temperature (40–80 ?C) for preparing protein fibrils. Then the amount of amyloid fibrils was detected by spectrophotometric congored binding assay. Results: In this research, effect of four variables include temperature, pH, time of incubation and protein concentration was investigated on fibrillogenesis and results were confirmed by congored spectrophotometric method as ?max and absorbance in ?max (A?max) accompanying with transmission electron microscopy. The optimum condition for fibrilogenesis was specified in 5 mg.ml-1 of protein and buffer pH of 3 after 72 hour incubation in 70?C. Conclusion: Simple congored spectrophotometric method could be used as primary test for evaluating protein nanobiofibrils and absorbance in ?max is introduced as a valid indicator in this way.