ايجاد بانك ذخيره ايزوله هاي مختلف پلاسموديوم هاي فالسيپاروم و ويواكس جمع آوري شده از بيماران مبتلا به مالاريا به منظور بررسي هاي ژنتيكي و زيستي

Creating a reserve bank of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax isolates collected from malaria patients for use in studies on the genetic and biological features

زمینه و هدف: ایجاد یك مخزن برای ذخیره سازی و حفظ انگل های مالاریا در شرایط حاضر كه كشور درگیر برنامه های ملی حذف مالاریا می باشد می تواند امكان دسترسی به یك منبع غنی را به منظور دستیابی و استفاده بالقوه از ژن ها و پروتیئن های منتج از گونه های پلاسمودیوم های انسانی در اختیار پژوهشگران و محققان كشور قرار دهد. با توجه به كاهش روز افزون شمار مبتلایان به مالاریا در كشور لازم است هر چه سریعتر در گردآوری مجموعه پلاسمودیوم های موجود و بومی منطقه با شناسایی و ثبت ژن های متعلقه اقدام كرده  تا زمینه برای مطالعات تكمیلی و كاربردی برای جامعه علمی كشور هموار گردد. روش كار: پس از بیماریابی از مناطق اندمیك مالاریا، گسترش نازك و ضخیم تهیه ورنگ آمیزی گیمسا انجام گرفت. به منظور نگهداری طولانی مدت نمونه ها مونته و در آرشیو طبقه بندی شد. همچنین میزان 2 میلی لیترخون از افراد آلوده جمع آوری و كرایوپرزرویشن ایزوله ها انجام شد. بنا به اقتضا و در نظر گرفتن بودجه تعدادی از ایزوله ها  جهت تعیین شاخص ژنتیكی MSP-1 با استفاده از روشهای ملكولی PCR و PCR-RFLP مورد بررسی قرار گرفتند. برای نمونه­های پلاسمودیوم فالسیپاروم ذخیره شده تست حساسیت به دارو به طریقه درون تنی انجام و نتایج ثبت شد. جمع آوری و حفظ نمونه­ها در شرایط انجماد فعالیت مداوم بانك بوده و ادامه خواهد داشت. نتایج: دست آورد های حاصل از این طرح شامل ذخیره 131 نمونه جمع آوری شده برای جامعه علمی كشورمی باشد كه شامل 109 ایزوله پلاسمودیوم ویواكس، 19 ایزوله از پلاسمودیوم فالسیپاروم، و سه نمونه میكس بوده است. هر ایزوله ی حفظ شده دارای شناسنامه اختصاصی از جمله تعیین گونه، شمارش انگلی، ملیت، محل ابتلا می باشد. در  طبقه بندی ژن MSP-1 برای نمونه­های پلاسمودیوم ویواكس مجموع سه هاپلوتایپ مختلف شناسایی شد كه بر اساس وزن باندهای ایجاد شده در اثر برش آنزیم PVU II به ترتیب شامل سه نوع هاپلوتایپ با فراوانی  6/20%،  2/41% و بالاخره 2/38% بود. در مورد ایزوله های پلاسمودیوم فالسیپاروم حفظ شده تست درون تنی (in vivo) نسبت به داروی خط اول درمان در كشور (آرتسونات- فانسیدار)، حساسیت كلیه ایزوله ها را نشان داد. نتیجه گیری: انجام این پروژه استفاده از ذخایر حاضر را در قالب كار روتین امكان پذیر ساخت كه در صورت كلون سازی تا مدتها قابل بهره برداری برای محققین علمی كشور می باشد.

Background and Aim: Considering the ongoing national malaria elimination program in Iran, establishing a bank of human Plasmodium genes and proteins can be very useful for research purposes. This study was conducted to collect some of the native isolates of human Plasmodia from endemic areas in the country. Materials and Methods: A 2ml vein-punctured blood sample was prepared from each confirmed malaria case. The samples were dispensed in EDTA pre-dosed tubes and cryopreserved for further tests. Moreover, relevant Geimsa-stained thick and thin blood smears were kept in a safe place. Tests for genetic indicators of MSP-1 was performed for each of the P. vivax samples with the RFLP-PCR techniques. In addition, an in vivo drug sensitivity test was performed for each P. falciparum case. Collecting and cryopreserving samples will continue. Results: A total of 131 samples, including 109, 19 and 3 P. vivax, P. falciparum and mixed samples, respectively, were preserved with relevant data such as species, parasitaemia and nationality of the donor. MSP-1 gene classification resulted in three different haplotypes including Hap.1, Hap.2 and Hap.3 with frequencies of 20.6%, 41.2% and 38.2%, respectively. The In vivo drug sensitivity tests on P. facilparum isolates showed that all of the isolates were sensitive to the current drug of choice, namely, a combination of artesunate and fansidar. Conclusion: This study resulted in the preservation of considerable amounts of P. vivax and P. falciparum samples for further relevant studies and research purposes.