فراواني نسبي ژن كد كننده عامل پنتون والنتين لكوسيدين در استافيلوكوك اورئوس مقاوم به متي‌سيلين جدا شده از خون و زخم در شهر زاهدان

The Study of Pantone Valentin Leukocidin (PVL) Gene in Methicillin-resistant Staphylococcus Aureus Isolated from Blood and Wound in Zahedan, Iran

زمینه و هدف:  پنتون‌ـ والنتین لكوسیدین یك توكسین از خانواده گاما توكسین در استافیلوكوك اورئوس محسوب می‌شود. ممكن است یك ارتباط بین استافیلوكوكوس اورئوس مقاوم به متی سیلین و پنتون ـ والنتین لكوسیدین، كه یك سیتوتوكسین مهم خصوصاً در عفونت‌های شدید است، وجود داشته باشد. هدف از این مطالعه، جداسازی و شناسایی ژن عامل لكوسیدین پنتون‌ـ والنتین از ایزوله های استافیلوكوكوس اورئوس مقاوم به متی سیلین با استفاده از تكنیك PCR از نمونه‌های خون بود. روش بررسی: در این مطالعه توصیفی‌ـ‌ مقطعی، 89 ایزوله استافیلوكوك اورئوس از نمونه‌های خون و زخم طی 6  ماه از بیمارستان علی‌ابن‌ابی‌طالب زاهدان جمع‌آوری شد. در ابتدا نمونه‌های مورد مطالعه به وسیله تست‌های مختلف بیوشیمیایی مورد بررسی قرار گرفتند و بر اساس استانداردهای تشخیصی ایزوله‌های استافیلوكوك اورئوس جداسازی شدند. جهت تأیید ایزوله‌های به دست آمده از ژن 16srRNA استفاده شد. حساسیت ایزوله‌ها نسبت به آنتی‌بیوتیك‌ها بر اساس دستورالعمل موسسه استاندارد آزمایشگاهی بالینی بررسی شد. سپس با استفاده از روش سفوكسیتین(30میكروگرم) دیسك دیفیوژن نمونه‌های مقاوم به متی‌سیلین غربالگری شد و سپس ژن‌هایPVL و mecA به وسیله آزمایش PCR مورد شناسایی قرار گرفت. داده‌های جمع‌آوری شده با استفاده از آزمون اماری مجذوركای تجزیه و تحلیل شدند. یافته‌ها: از مجموع 89 ایزوله استافیلوكوك اورئوس26 ایزوله از زخم و 63 ایزوله از خون جداسازی شد. بیشترین نمونه‌های به دست آمده از بیماران زن به دست آمد. با توجه به نتایج آزمایش‌های مولكولی،47 ایزوله(82/52  درصد) دارای ژن mecA و مقاوم به متی‌سیلین و 42 ایزوله(2/47) حساس به متی‌سیلین بودند. هم‌چنین، 16 ایزوله به‌ عنوان حامل ژن PVL شناسایی شد كه از این میان 13 ایزوله مقاوم به متی سیلین و 3 ایزوله حساس به متی سیلین بودند. مقاومت به ونكومایسین در هیچ یك از ایزوله‌ها مشاهده نشد. بیشترین مقاومت نسبت به اریترومایسین و پنی‌سیلین در بین ایزوله‌ها مشاهده شد. سویه‌های دارای مقاومت چندگانه دارای بیشترین فراوانی از نظر ژن PVL بودند. هم‌چنین ارتباط معنی داری بین مقاومت و حضور ژن پنتون والنتین مشاهده شد(0043/0 = p). نتیجه‌گیری: با توجه به فراوانی ژن‌های mecA و PVL در سویه‌های مقاوم و حساس استافیلوكوك اورئوس و پراكنش بالای ژن عامل پنتون والنتین در سویه‌های مقاوم، بر اساس آنالیزهای آماری، می‌توان نتیجه گرفت كه ممكن است بین این دو ژن ارتباطی وجود داشته باشد.

Background & aim: Panton-Valentine leukocidin (PVL) is a Staphylococcus aureus gamma toxin. There may be a link between Meticillin-Resistant Staphylococcus aureus and Panton-Valentine leukocidin (PVL), as an important cytotoxin found particularly in severe infections. The purpose of this study was to isolate and identify Staphylococcus aureus virulence Panton-Valentine leukocidin (PVL) and methicillin resistance genes in clinical samples using PCR techniques. Methods: In the present cross-sectional study, 89 isolates were collected from blood samples and detected as Staphylococcus aureus during the period of 6 months at Ali Ebne AbiTaleb Hospital, Zahedan, Iran. Initially, the case study examples were examined by biochemical tests. Then, based on recognized standards, Staphylococcus aureus isolates were isolated. Afterwards, isolates obtained were confirm by using 16srRNA gene. Subsequently, the antibiotic susceptibility of all isolates to methicillin was determined using Cefoxitin(30µg) disk diffusion and agar screening methods. Finally, the PCR method was used to determine PVL and mecA genes. All results were analyzed by the Chi-square test. Results: Out of the total 89 isolates of Staphylococcus aureus blood isolates, 26 isolates from wounds and 63 were isolated. Most samples were obtained from female patients. According to the molecular analysis, 47 isolates (82/52%) were mecA gene and resistant to methicillin and 42 strains (47/2%) was methicillin-sensitive. Resistance to vancomycin wasn’t observed in isolates. Erythromycin and Penicillin had the highest prevalence of antibiotic resistance among isolates, respectively. Multi-resistant strains were the most PLV genes frequent. A significant relationship was observed between the resistance and the presence of Pantone Valentin (P≥0 / 05). Conclusions: Due to the frequency of mecA and PLV genes in resistant and susceptible strains of Staphylococcus aureus, and also the distribution of Pantone Valentin gene in resistant strains; therefore, based on the statistical analysis, we can conclude that there may be a connection between these two factors (P≥0 / 05).