كاهش بيان ژن CHID1 توسط ميكروپارتيكل‌هاي كيتين در كشت مختلط لكوسيتي

Downregulating the Expression of CHID1 by Chitin Microparticles Mixed Leukocyte Culture

زمينه و هدف: ميكروپارتيكل‌هاي كيتين و مشتقات آن خواص تعديل پاسخ‌هاي ايمني را دارند. در اين تحقيق تاثير اندازه، خلوص و ميزان استيلاسيون ميكروپارتيكل‌ها بر بيان ژن CHID1 - كه پروتيين التهابي SI-CLP را كد مي‌كند - در كشت مختلط لكوسيتي مورد سنجش قرار گرفت. مواد و روش‌ها: ميكروپارتيكل‌هاي كيتين در اندازه كوچك(كمتر از 40 ميكرون) و متوسط(40 تا 70 ميكرون) به روش سونيكاسيون تهيه شدند و در مقايسه با ميكروپارتيكل‌هاي كوچك كيتين داستيله (كيتوسان) و ناخالص (پوسته ميگو)، در تيمار كشت مختلط لكوسيتي مورد استفاده قرار گرفتند. براي بررسي توكسيسيتي ميكروپارتيكل‌ها از روش نوترال رد و سنجش ميكروسكوپي آپوپتوز استفاده شد. در نهايت به دنبال تيمار سلول‌ها با غلظت 100 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر ميكروپارتيكل‌ها به مدت 48 ساعت، بيان ژنCHID1 به روش واكنش زنجيره‌اي پلي مراز زمان واقعي اندازه‌گيري شد. يافته‌ها: ميكروپارتيكل‌هاي متفاوت كيتيني در غلظت‌هاي مختلف اثرات سايتوتوكسيك نداشتند. در بررسي بيان ژن، فقط ميكروپارتيكل‌هاي كوچك ‌كيتين باعث كاهش بيان CHID1 شدند(004/0=p)، در حالي كه ساير ميكروپارتيكل‌ها تغييرمعني‌داري در كاهش يا افزايش بيان اين ژن ايجاد نكردند. نتيجه‌گيري: مداخله ميكروپارتيكل‌هاي كيتيني در ميان‌كنش سلول‌هاي ايمني متاثر از اندازه، خلوص و ميزان استيلاسيون آن‌ها است و به نظر مي‌رسد ميكروپارتيكل‌هاي كوچك كيتين توان تغيير وتعديل پاسخ‌هاي ايمني را از طريق كاهش بيان ژن CHID1 داشته باشند. استفاده از ميكروپارتيكل‌هاي كوچك كيتين ممكن است در درمان آلرژي‌ها كه راه‌كار درماني آن‌ها تعديل پاسخ‌هاي ايمني است موثر باشد.

Background: chitin and its derivates microparticles (MPs) have immunomodulatory activities. In this study, we examined the effect of size, purity and acetylation degree of chitin MPs on CHID1- encoding SI-CLP, involved in inflammation- gene expression in mixed leukocyte culture. Materials and Methods: Small ( < 40?) and medium(40-70?) sized chitin MPs were prepared by sonication, and they were used in treatment of leukocyte mixed culture in comparison with chitosan and also shrimp shell small-sized MPs. Neutral red uptake assay and microscopic examination of apoptosis were used to assess cytotoxicity of MPs. Finally, following cell treatment with MPs (100 ?g/mL) for 48h, expression levels of CHID1 gene were determined by Real Time PCR. Results: Different concentrations of chitinous MPs hadn’t any cytotoxic effects. In gene expression analysis, small-sized chitin MPs ( < 40 µ) resulted in down regulation of CHID1 gene expression (p=0.004), while other MPs didn’t change it significantly. Conclusion: Size, purity and acetylation degree of chitin MPs influence their interference in immune cells interactions and it seems small-sized chitin MPs can potentially modulate immune responses through decreasing CHID1 gene expression. Using small-sized chitin MPs may be effective to treat allergies which their treatment strategies rely on modulating the immune responses.