مطالعه ويژگي ها و اثرات مهاركننده هاي آميلازي موجود در بذر لوبياي قرمز . Phaseolus vulgaris , L

Study of the characteristics and effects of amylase inhibitors present in the seeds of the red bean Phaseolus vulgaris

مهاركننده‌هاي آنزيمي تركيباتي پروتئيني هستند كه گياهان در برابر آفت‌ها و عوامل بيماري زا توليد مي‌كنند. اين پروتئين ها غالباً در بذرها يافت شده و با بازدارندگي تغذيه ايي براي گياه نقش دفاعي دارند. در اين پژوهش پروتئين هاي بذر لوبياي قرمز واريته‌ي صياد Phaseolusvulgaris, L. به منظور ارزيابي بازدارندگي آنها بر فعاليت آلفا آميلاز قارچ Aspergillus oryzae, S.  جداسازي، خالص سازي و ويژگي آنها مطالعه گرديد.پروتئين­هاي استخراج شده با درصدهاي اشباع %(300)، %(6030) و %(10060) از نمك آمونيوم سولفات رسوب داده شدند. به ‌منظور برداشته شدن آمونيوم سولفات دياليز انجام شد.مهاركنندگي هر يك از نمونه‌هاي پروتئيني حاصلهبر فعاليت آلفاآميلاز oryzaeAspergillus بر اساس روش استاندارد شده  و با  استفاده از معرف لوگل  انجام شد. نتايج نشان داد تنها پروتئين هاي رسوب يافته در غلظت ‌ %(6030) اشباع از آمونيوم سولفات داراي فعاليت مهاركنندگي  در برابر آلفاآميلاز مورد مطالعه هستند. مهاركنندگي اين فركشن 32/89  درصد محاسبه گرديد. به منظور تعيين ويژگي هاي اين مهاركننده‌ها آناليز HPLC و SDSPAGE انجام گرديد. با سنجش اثر اين مهاركننده‌ها بر روي آلفاآميلاز بزاقي و پانكراسي شايد بتوان از اين مهاركننده‌ها همچون مهاركننده‌هاي آلفاگلوكوزيدازي آكاربوز و ميگليتول براي درمان ديابت نوع دو غير وابسته به انسولين استفاده كرد. در كشاورزي نيز مي‌توان با ايجاد گياهان تراريخته كه مهاركننده‌هاي آميلازي را بيان مي‌كنند، گياهان مقاوم به آفت توليد كرد.

Cereal and legume kernels contain many αamylase inhibitors which have the potential to inhibit the αamylase activity from various sources. The subject of this study was the partial purification of αamylase inhibitors of red bean seeds. To this end, extractions were carried out in three parts with different saturation percentages of ammonium sulfate. Iin order to remove ammonium sulfate and monitor the inhibitory activity of the extracts on Aspergillus oryzae αamylase, dialysis was carried out. By assaying the rate of inhibitory activity of each sample on the basis of their absorbance in 540 nm and comparison to absorbance of negative control, it was observed that only (3060)% fraction of each extract had inhibitory activity on the αamylase. Inhibitory effect of these fractions for red bean extract were calculated to be 89.32 %. For further characterization of these inhibitors, HPLC and SDSPAGE analyses were carried out. By assaying the activity of these inhibitors on other αamylases such as salivary and pancreatic α amylases, it may be feasible to use these amylase inhibitors similar to other inhibitors such as Acarbose and Miglitol, for the treatment of type II diabetes. The results may also be applicable in agriculture in the design of transgenic plants that express αamylase inhibitors against αamylases of pests.