همسانه سازي، انتقال و بيان دائم فيوژن ژن هاي اينترفرون گاماي انساني و bar در گياه توتون

توليد پروتئين اينترفرون گاماي انساني در سيستم هاي بياني يوكاريوتي، به عنوان يك پروتئين نوتركيب درماني، در مطالعات پزشكي اهميت بسياري دارد. ويژگي هاي اينترفرون گاما، آن را به يك فاكتور ضد سرطاني مناسب تبديل كرده است. فسفينوتريسين (PPT) مهاركننده گلوتامين سينتاز است و از گروه علف كش هاي غيرانتخابي بيالافوس مي باشد. ژن bar كد كننده آنزيم فسفينوتريسين استيل ترانسفراز (PAT) است. اين آنزيم باعث ايجاد مقاومت به علف كش فسفينوتريسين مي شود و مي تواند به عنوان يك نشانگر انتخابي در گياهان استفاده شود. در اين پژوهش، ژن اينترفرون گاماي انساني و ژن bar به صورت فيوژن در ناقل بياني گياهي pCAMBIA 1305.1 تحت كنترل پيش برنده CaMV35S و خاتمه دهنده NoS همسانه سازي شد. صحت همسانه سازي فيوژن IFNγ- Barدر ناقل بياني حاضر با استفاده از تكنيك هاي مختلفColony PCR، هضم آنزيمي و توالي يابي تاييد شد. سازه ي تهيه شده (pCAMBIA1305.1- IFNγ- Bar) با استفاده از روش انجماد و ذوب به اگروباكتريوم سويه ي LBA4404 انتقال داده شد و با استفاده از روش ديسك برگي در ژنوم گياه توتون ادغام شد. گياهان تراريخته احتمالي در محيط گزينشگر، حاوي 30 ميلي گرم در ليتر هيگرومايسين انتخاب شدند. پس از ريشه دار شدن به خاك انتقال يافتند و حضور فيوژن IFNγ- Barدر ژنوم اين گياهان با استفاده از تكنيك PCR تاييد شد. در آناليز دات بلات نيز حضور پروتئينIFNγ-bar در گياهان تراريخت توتون تاييد شد.