بيان فاكتورهاي اصلي نوتركيب EspA-Intimin از باكتري E. coli O157:H7 در گياه تنباكو به منظور توليد واكسن خوراكي

يكي از پاتوژن هاي مهم ايجاد كننده كوليت هموراژيك و نشانگان هموليتيك اورميك در انسان باكتري اشرشياكلي هموراژيك سويه O157H7 مي باشد. دام ها اصلي ترين مخزن اين باكتري مي باشند. دو فاكتور پروتئيني با اهميت در كلونيزاسيون باكتري در اپيتليوم روده EspA و Intimin هستند كه باعث ايجاد آسيب هاي تخريبي به واسطه اتصال مي گردند. اين پروتئين ها توسط جزاير بيماري زايي LEE (Locus of Enterocyte Effacement) كد مي شوند. EspA بخشي از سيستم ترشحي نوع III مي-باشد كه موجب انتقال پروتئين Tir به سلول ميزبان و ورود آن به غشا سلول مي شود. اينتيمين توسط ژن eae كد شده و به Tir متصل مي گردد. اين تحقيق بر اين اساس است كه ژن كايمريك و نوتركيب EI شامل EspA و Intimin كه به واسطه يك لينكر به يكديگر اتصال يافته اند مي تواند به عنوان كانديداي ايمني زايي خوراكي در نظر گرفته شود و موجب كاهش كلونيزاسيون O157:H E. coli در مدل حيواني گردد. بدين منظور ژن سنتتيك EspA (120) و Intimin (282) كه توسط توالي 4(EAAAK) به يكديگر متصل شده بود ساخته شد. ژن ساخته شده بر اساس كدون هاي گياه توتون بهينه سازي و سپس تحت كنترل پروموتر Camv35s در ناقل بياني گياه كلون و پس از آن به واسطه انتقال توسط آگروباكتريوم به گياه توتون منتقل گرديد. ورود ساختار ژني نوتركيب در برگ هاي گياه توتون توسط آزمون PCR تاييد شد. در مرحله بعد بيان ژن مورد نظر به روش RT-PCR بررسي و تاييد گرديد. در نهايت ميزان پروتئين EI در برگ هاي توتون تراريخته توسط روش اليزا تخمين زده شد كه برابر با 1/0 درصد از كل پروتئين محلول در برگ گياه بود.