بررسي متيلاسيون پروموتر ژن P14/ARF و تاثير پلي‌مورفيسم ژن اينترلوكين 17 بر اين متيلاسيون در بيماران مبتلا به سرطان پستان

Study of P14/ARF Gene Promoter Methylation and Effect of Interleukin-17 Gene Polymorphism on this Methylation among Breast Cancer Patients

زمينه: افزايش متيلاسيون در جزاير CpG، يكي از مكانيسم‌هاي مهم در خاموش شدن ژن مي‌باشد. در بسياري از سرطان‌ها، ژن‌هاي مختلفي دچار اين (CpG island hyper methylation) CIHM مي‌گردند. فاكتور تنظيمي P14/ARF در تنظيم منفي سيكل سلولي از طريق تاثير بر مسير فاكتور P53 دخالت دارد. از طرف ديگر اينترلوكين 17 با اثرات التهابي مي‌تواند باعث افزايش متيلاسيون گردد. هدف از اين تحقيق بررسي متيلاسيون پرومتر ژن P14/ARF و تاثير اينترلوكين 17 بر اين متيلاسيون در بيماران مبتلا به سرطان پستان در جنوب كشور ومقايسه آن با افراد سالم مي‌باشد. مواد و روش‌ها: در اين تحقيق موردي – شاهدي از خون محيطي 40 بيمار مبتلا به بيماري سرطان پستان مراجعه كننده به بيمارستان‌هاي شيراز و 40 زن سالم، جهت استخراج DNA، با استفاده از روش حذف نمكي (Salting out) و پروتييناز K استفاده گرديد. افراد كنترل داراي سابقه خانوادگي سرطان يا بيماري‌هاي خود ايمني از مطالعه حذف گرديدند. جهت بررسي پلي مورفيسم ژن اينترلوكين 17، از روش PCR-RFLP و جهت بررسي متيلاسيون پروموتر ژن P14/ARF، از روش MSPCR استفاده گرديد. نتايج حاصله از مطالعه با استفاده از نرم‌افزار SPSS و آرلي‌كويين و آزمون‌هاي مجذور كاي (X2) و Hardy-weinberg equilibrium به ترتيب مورد مطالعه قرار گرفت. يافته‌ها: يافته‌ها مويد اين مطلب بود كه، ميان متيلاسيون پروموتر ژن P14/ARF و ايجاد بيماري ارتباط معني‌داري وجود دارد بدين‌صورت كه پروموتر ژن مذكور در افراد سالم نسبت به افراد بيمار به ميزان كمتري متيله شده بود (05/0 > P). از طرف ديگر يك ارتباط معني‌داري ميان ژنوتيپ GG در پلي‌مورفيسم ژن IL17 F و متيلاسيون ژن P14/ARF مشاهده گرديد (05/0 > P). نتيجه‌گيري: متيلاسيون پروموتر ژن P14/ARF نقش مهمي در ايجاد سرطان پستان ايفا مي‌كند با توجه به كاهش متيلاسيون پروموتر ژن P14/ARF و ارتباط آن با اين بيماري، به نظر مي‌رسد كه بتوان ازآن به عنوان يك بيوماركر براي تشخيص بيماري استفاده نمود.

Background: hyper-methylation in CpG Island is one of the major mechanisms in gene silencing. In many cancers, different genes are experiencing CIHM (CpG island hyper methylation). P14 / ARF regulatory factor, involved in negative regulation of the cell cycle through the effect on P53 factor pathway. On the other hand, Interleukin 17 can be increased methylation by inflammatory effects. The purpose of this study was to study the P14/ARF gene promoter methylation and effect of Interleukin-17 on this methylation among breast cancer patients in the south of the country and its comparison with healthy people. Materials and Methods: in this case–control study, peripheral blood of 40 patients with breast cancer who were referred to hospitals in Shiraz and 40 healthy women was used to DNA extraction by using salt out and K proteinase . Control subjects with a family history of cancer or autoimmune diseases were excluded from the study. We used PCR-RFLP method In order to study of Interleukin-17 gene polymorphism, and MSPCR method was used to study of P14/ARF gene promoter methylation. The results of the study were studied by using SPSS software, Arlequin, chi-square and Hardy-weinberg equilibrium test was used respectively. Results: findings confirms that there was a significant association between P14/ARF gene promoter methylation and disease and mentioned gene promoter was less methylated in healthy subjects compared to patients (p < 0.05). On the other hand, there is a significant association between GG genotype in IL17 F gene polymorphisms and P14 /ARF gene methylation (P < 0.05). Conclusion: P14/ARF gene promoter’s methylation play an important role in breast cancer. Due to the decline of P14P14/ARF gene promoters methylation and its association with this disease, seems that it could be used as a biomarker for diagnosis.