ارزيابي پنير ليقوان ازنظر وجود باكتري لاكتوكوكوس گارويه با تكيه‌بر روش هاي مبتني بركشت و روش مولكولي ژن ناحيه S rRNA16

Evaluation of hygiene Lighvan cheese aspects regarding Lactococcus garvieae bacteria relying on culture-based and molecular methods

باكتري لاكتوكوكوس گارويه گونه بيماري‌زاي جنس لاكتوكوكوس بوده كه عامل بيماري در انسان (اندوكارديت) و دام (لاكتوكوكوزيس در ماهي و ورم پستان در گاوهاي شيري) است، وجود اين باكتري در توليدات حاصل از شير خام همانند پنير ليقوان گزارش شد است.در اين پژوهش از شير تازه، دلمه، پنير تازه و پنير رسيده و همچنين علف تازه منطقه ليقوان جهت ايزوله كردن باكتري استفاده گرديد. آزمون­هاي بيوشيميايي در دماي °C10 و °C45 و رشد در غلظت نمك طعام %4 و %6.5 صورت گرفت. سپس استخراج DNA، و واكنش PCR به‌منظور شناسايي ژن ناحيه S rRNA16 با پرايمر اختصاصي لاكتوكوكوس، انجام شد و آمپليكون­هاي آن توسط شركت Source BioScience انگلستان تعيين توالي شدند. سپس در پايگاه داده هاي ژني NCBI توالي هايي كه بيش از %97 مشابهت داشتند، ازنظر جنس و گونه تعيين هويت شدند.در آغاز 1500 ايزوله سپس در ادامه توسط آزمون­هاي ديگر 625 ايزوله و درنهايت 60 ايزوله به‌عنوان لاكتوكوكوس انتخاب گرديد سپس با تعيين توالي ژن ناحيه S rRNA16 به‌طور دقيق 2 مورد لاكتوكوكوس گارويه، 2 مورد لويكونوستوك لاكتيس، 5 مورد لويكونوس توك مزونتروئيدس، يك مورد لويكونوستوك گارليكوم و بيشترين تعداد يعني 50 ايزوله لاكتوكوكوس لاكتيس گزارش شد.حضور كمرنگ باكتري لاكتوكوكوس گارويه كه آن‌هم در مراحل اوليه توليد پنير ليقوان بوده است، نويد خوبي براي ايمني بيشتر پنير ليقوان ازنظر وجود اين باكتري بيماري‌زا مي‌باشد چون در پنير تازه و پنير رسيده موردي از حضور اين باكتري مشاهده نشد.

One of the pathogenic bacteria species in the genus of Lactococcus is Lactococcus garvieae. It causes human disease (endocarditis) and mastitis in dairy cows to appear. The presence of these bacteria in the raw milk products like Lighvan cheese was reported. Lighvan cheese is a traditional cheese which is made from raw sheeps milk.In this study, fresh milk, curd, Fresh cheese and ripe cheese, and fresh grass Lighvan area was used to isolate bacteria. Biochemical tests at 10°C and 45°C and grow in salt concentration 4% and 6.5 %, was performed. After extraction of DNA, PCR reaction with primers for genes of Lactococcus 16S rRNA performed and the products were sequenced by the company Source BioScience England, then in gene databases NCBI, the sequence of which more than 97% were similar in terms of genus and species were identified.At first, 1500 colonies similar to Lactococcal genera isolated from different sources such as fresh grass, fresh milk, curd, fresh cheese and ripened cheese according to colony morphology. Then, the 625 isolates were selected by gram stain. The biochemical tests carried out to select 60 isolates of Lactococcal genus and the PCR was used to determine the 16S rRNA gene sequence region to identify species. Based on molecular identification 50 species, were belonged to the Lactococcal genera and finally two species of Lactococcus were Lactococcus garvieae.According to the results, the presence of two species of Lactococcus garvieae (fresh milk and curd) was demonstrated in the early stages of Lighvan cheese production, But, there was no presence of the bacteria in fresh cheese and ripened cheese.