تعيين برخي ويژگي هاي كاتاليتيكي و آناليز مولكولي ژن آنزيم اندو-بتا-1و4-گلوكاناز سويه Bacillus subtilis A14h جدا شده از مزارع برنج

سلولازها با فعاليت همزمان سه آنزيم اندو-بتا-1و4-گلوكاناز، سلوبيوهيدرولاز و بتا-گلكوزيداز مي­توانند سلولز را به واحدهاي گلوكز تجزيه كنند. در حال حاضر، سلولازها اغلب در صنايع خوراك دام، نساجي، تصفيه پساب، آبجوسازي و توليد سوخت­هاي زيستي استفاده مي شوند و تقاضا براي خريد اين آنزيم­ها با ويژگي­هاي كاتاليتيكي خاص رشد فزاينده­اي دارد. در اين مطالعه سويه Bacillus subtilis A14h با قابليت توليد آنزيم سلولاز با استفاده از روش­هاي بيوشيميايي و مولكولي (ژن 16SrDNA) شناسايي شد. شرايط بهينه عملكرد آنزيم توليد شده توسط سويه مورد نظر در حضور دو نوع سوبسترا (كربوكسي متيل سلولز و بتا گلوكان) ودر محدوده دمايي C°70-30 و در pH 6/4 ارزيابي شد. همچنين ژن­ اندو-بتا-1و4-گلوكاناز نيز با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي تكثير، توالي يابي ونتيجه در پايگاه اطلاعاتي NCBI ثبت شد. آناليز توالي هاي به دست آمده و رسم درخت فيلوژني با استفاده از نرم­افزار Vector NTI و Mega.4 انجام شد. نتايج نشان داد كه جدايه مورد بررسي متعلق به گونه B. subtilis است. همچنين نتايج آناليز فيلوژنتيكي و مقايسه توالي آمينو اسيدي ژن اندو-بتا-1و4-گلوكاناز سويه مورد بررسي نشان داد كه ناحيه كاتاليتيكي آنزيم مذكور متعلق به خانواده 5 گليكوزيل ­هيدرولازها بوده و ناحيه غيركاتاليتيكي آن در خانواده 3CBM قرار گرفته و بيشترين شباهت را به آنزيم سلولاز سويه هاي B. subtilis دارند. هم چنين نتايج نشان داد كه بيشترين ميزان فعاليت آنزيمي در حضور سوبستراي بتاگلوكان و دماي 55 درجه سانتي گراد معادل U/ml 1464 تخمين زده شد.