فرابيان ژن شبه استريكتوسيدين سينتاز-6 در گياه Arabidopsis thliana

استريكتوسيدين سينتاز يك آنزيم كليدي مسيير بيوسنتز ايندول الكالوئيدهاي مونوترپني مي باشد. آرابيدوپسيس قادر به توليد تركيبات آلكالوئيدي نيست اما، ژن هايي مشابه استريكتوسيدين سينتاز در آن شناسايي شده است. ژن SSL6 از اعضاء خانواده ژني شبه استريكتوسيدين سينتاز آرابيدوپسيس مي باشد كه در اين تحقيق پاسخ ژن آن به تيمار شوري بصورت كمي بررسي و سپس در گياه آرابيدوپسيس فرابيان شد. بمنظور توليد موتانت فرابيان ژن SSL6 RNA كل استخراج و رشته اول cDNA با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي ژن ساخته شد. كلون سازي ابتدايي در ناقل pJET انجام و متعاقبا به سازه فرابياني گياهي (pPZPY:SSL6) منتقل شد. در ترانسفورماسيون آرابيدوپسيس از اگروباكتريوم نژاد GV3101(PMP90) و تكنيك غوطه وري گل آذين استفاده شد. آناليز گياهان تراريخت احتمالي در ابتدا با كشت بذرهاي حاصل از گياهان تلقيح شده بر روي محيط گزينشي حاوي آنتي بيوتيك جنتامايسين و گزينش گياهچه هاي مقاوم انجام شد. در ادامه گياهان تراريخت احتمالي در طي واكنش PCR با پرايمرهاي اختصاصي ژن SSL6 با توليد الگوهاي باندي متفاوت در الكتروفورز در مقايسه با گياهان وحشي و همچنين پرايمرهاي اختصاصي ژن ماركر جنتامايسين جداسازي شدند. ميزان افزايش بيان ژن انتقال يافته نسبت به گياه مادري با واكنش Real-Time PCR بر روي گياهان نسل T2 انجام و نتايج نشان داد افزايش بيان ژن SSL6 در گياهان تراريخته به طور قابل ملاحظه اي بالاتر از گياه مادري بوده است. تعدادي لاين تراريخت حاوي يك نسخه تراژن از طريق تفرق صفت مقاومت به آنتي بيوتيك جنتامايسين در محيط كشت انتخابي در نسل T2 و T3 انتخاب شدند. بررسي كمي بيان ژن SSL6 در گياهان وحشي Col-0 نيز نشان داد كه تنش شوري موجب افزايش معني دار بيان ژن، شش ساعت پس از اعمال تيمار شد.