بررسي قدرت تشخيصي روشهاي ايمونوفلئورسانس مستقيم( (DFAو رنگ آميزي گيمسا در مقايسه با روش PCR ژن Omp1 جهت شناسايي كلاميديا تراكوماتيس در نمونه ملتحمه بيماران مبتلا به كونژنكتيويت فوليكولار مراجعه كننده به بيمارستان فارابي در سال 1392

Analysis of the dDiagnostic pPower of dDirect immunofluorescence (DIF) method and Giemsa staining in cComparison to the PCR method for detection of Chlamydia trachomatis in the cConjunctiva sSamples of pPatients with follicular conjunctivitis referred to

سابقه و هدف: كلاميديا تراكوماتيس يك باكتري داخل سلولي اجباري با اهميت كلينيكي بالا ميباشد كه عفونتهاي انساني ناشي از اين باكتري ترجيحاً چشمها و دستگاه تناسلي را گرفتار ميكنند. كلاميديا تراكوماتيس، شايعترين عامل كونژنكتيويت فوليكولار مزمن و عامل 20 درصد موارد كونژنكتيويت حاد مي باشد. از آنجاييكه تشخيص سريع مي تواند در كاهش عوارض طولاني مدت بيماري موثر باشد در اين تحقيق ما بر آن شديم كه روشهاي مختلف تشخيص كلاميديا شامل رنگ آميزي گيمسا، DIF (ايمونوفلورسانس مستقيم) و PCR ژن Omp1 را در مورد نمونه هاي ملتحمه بيماران مبتلا به كونژنكتيويت فوليكولار مراجعه كننده به بيمارستان فارابي در سال 1392 را مورد بررسي قرار دهيم. روش بررسي: در اين مطالعه توصيفي تشخيصي از نمونه 90 بيمار مبتلا به كونژنكتيويت فوليكولار كه در سال 1392 به آزمايشگاه بيمارستان فارابي مراجعه كرده بودند، استفاده شد. نمونه گيري با توجه به معيارهاي ارائه شده از طرف سازمان بهداشت جهاني، با استفاده از اسكراپ و از سطح ملتحمه فوقاني بيمار انجام شد. در رنگ آميزي گيمسا انكلوزيون ها به رنگ ارغواني ديده شدند. در DIF اجسام اوليه و انكلوزيون بادي پس از رنگ آميزي با آنتي بادي كونژوگه با فلورسئين به صورت فلورسانس سبز رنگ با ميكروسكوپ ايمونوفلورسنس ديده شدند. PCR با پرايمرهاي CT1 ، CT5 جهت شناسايي ژن Omp1 بر روي DNA استخراج شده از نمونه ها انجام شد. نتايج با الكتروفورز بر روي ژل آگارز 1/5% مشخص شد. يافته ها: از 90 بيمار با علائم كونژنكتيويت فوليكولار در 28 نفر (31/1%) با روشهاي ايمونوفلورسانس مستقيم و در 13 نفر (14/4%) با استفاده از رنگ آميزي گيمسا و در 35 نفر (38/8%) با روشPCR ژن Omp1 ، عفونت كلاميديايي مورد شناسايي قرار گرفت. حساسيت و اختصاصيت و ارزش اخباري مثبت و منفي روش ايمونوفلورسانس مستقيم در مقايسه با PCR به ترتيب معادل 88/33، 001، 001، 88/70 درصد و حساسيت و اختصاصيت و ارزش اخباري مثبت و منفي روش رنگ آميزي گيمسا در مقايسه با PCR به ترتيب معادل 61/46، 100، 100، 71/22درصد محاسبه شد. بنابراين حساسيت و ارزش اخباري منفي روش ايمونوفلورسانس بصورت معني داري بالاتر از روش گيمسا بود. نتيجه گيري: با توجه به مطالعه انجام شده ايمونوفلورسانس مستقيم در مقايسه با رنگ آميزي گيمسا جهت تشخيص كونژنكتيويت فوليكولار كلاميديايي روشي حساس تر و قابل اعتماد تر مي باشد.

Background and Aim: Chlamydia trachomatis is an obligate intracellular parasite responsible for ocular and genital infections in human. Chlamydia trachomatis is the most common cause of chronic follicular conjunctivitis and is also responsible for 20% of acute conjunctivitis cases. As a rapid diagnosis is important in the reducing the longterm squeal of the diseases, the objective of this study was to compare three methods including direct immunofluorescence (DIF) method, Giemsa staining and PCR for detection of chlamydia trachomatis in patients with follicular conjunctivitis referred to Farabi hospital in 1392. nbsp;Material and methods: Conjunctival scraping (n=90) was obtained from patients who were referred to the diagnostic laboratory of Farabi hospital during 2012. Smears were prepared by rolling half the swab on to the center of a glass slide. Smears were fixed and used for direct immunofluorescence (DIF) method using a genus specific fluorescein isothiocyanate labelled chlamydia monoclonal antibody. In Giemsa stain, diagnosis was based on the presence of inclusions that were basophilic and stained pinkishblue. PCR amplification after Extraction performed using CT1 and CT5 primers designed from Omp1 gene. Results: From the 90 patients examined for Chlamydia trachomatis in the eyes, 28 (31.1%) were positive by DIF and 13 (14.4%) by Giemsa staining; and 35 patients (38.8%) showed positive results in PCR. Sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of DIF in comparison to PCR respectively were calculated as 88.33, 100, 100 and 88.70. Sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of DIF in comparison to PCR respectively were calculated as 61.40, 100, 100 and 71.42. Therefore, sensitivity and negative predictive value of DIF are significantly higher than Giemsa staining. Conclusion: According to results of this study, DIF is more sensitive and more reliable than Giemsa staining for detection of Chlamydia trachomatis in the conjunctiva samples of patients with follicular conjunctivitis.nbsp;