غربال گري آنتي بادي انساني بر عليه توكسين كزاز با روش نمايش فاژي

Panning Of Human Antibody Against Tetanus Toxin by Phage Display Method

مقدمه و هدف:توكسين كزاز يكي از سمي ترين موادي است كه بر روي سيستم اعصاب مركزي تاثير دارد و باعث انقباض شديد عضلات مي شود. بنابراين، تشخيص سريع و درمان نوروتوكسين هاي تتانوس ضروري به نظر مي رسد. امروزه آنتي‌بادي‌ها‌ در حوزه‌هاي تشخيص و درمان جايگاه ويژه‌اي را به خود اختصاص داده‌اند. در اين‌ميان، آنتي‌بادي‌هاي منوكلونال كاملاً انساني به دليل عدم برانگيختن پاسخ ايمني در بدن و كارايي بالا در درمان بيماري‌ها مورد توجه قرار‌گرفته شده است. بلوغ تمايلي آنتي بادي ها كاربرد آن ها را در پزشكي و پروژه هاي تحقيقاتي تسهيل نموده است.در اين مطالعه، هدف ما غربال گري آنتي بادي كزاز با استفاده از روش نمايش فاژي و يافتن كاربرد قطعات آنتي بادي جدا شده از كتابخانه ايمن در ابزار تشخيصي و درماني مي باشد.روش كار:در تحقيق پيش‌رو، به وسيله ي روش نمايش فاژي غني سازي و غربال گري آنتي‌بادي منوكلونال نوتركيب انساني از يك فرد واكسينه با توكسوئيد كزاز انجام گرفته شد.كتابخانه با وكتور بيانيpSEX81 ساخته و براي غربال گري در اين كتابخانه، غني سازي با استفاده از روش نمايش فاژي انجام شد.يافته ها:فاژ كمكيM13K07 با تيتر pfu/ml1013آماده و توكسين تتانوس در ميكروپليتپوشش داده شد. روند غني سازي با استفاده از ذرات فاژ انجام و دقت فرآيند غني سازي توسط فاژELISA تاييد گرديد. تنها كلون با جذب نوري بالا از چرخه غني سازي جدا شد. براي جداسازي آنتي بادي هاي كزاز، ابتدا استخراج وكتور از كتابخانه انجام شد.پس از آن، پنج مرحله غني سازي صورت گرفت.قوي ترين غني سازي در چرخه چهارم رخ داد و وجود آنتي بادي كزاز را تاييد نمود. در مجموع50 تك كلني به صورت تصادفي از اين چرخه انتخاب و 20 كلون با اتصال قوي انتخاب و توالي يابي شدند.نتيجه گيري:در اين مطالعه، هدف ما غربال گري آنتي بادي كزاز با استفاده از روش نمايش فاژي و يافتن كاربرد قطعات آنتي بادي جدا شده از كتابخانه ايمن در ابزار تشخيصي و درماني مي باشد.

Inroduction and Objective:  Tetanus toxin is one of the most toxic substrate acting on the central nerve system causing severe muscle contraction. Rapid diagnosis and treatment of tetanus neurotoxins are crucial. Antibodies are important tools in research, diagnosis and treatment of diseases. Fully human mAbs because of minimum immunogenic reaction and high performance are important for treatment.Antibodies affinity maturation has facilitated their application in medicine and research projects.Methods: The principle of this study was to screening in immune antibody library for isolation high specificity antibody against tetanus toxin. Library was to construct with pSEX81 expression vector, and then pSEX81 was extracted from library.For screening in this library, biopanning was performed by phage display method.Results: Helper phage M13K07 was prepared at the titer of 1013pfu/ml. The tetanus toxin was coated in microtiter plate and biopanning process was done using phage particles. The exactness of enrichment process was confirmed by phage ELISA. Single clones wereisolated from biopanning cycle with highest optical density. To isolate the tetanus specificantibodies, first vector extraction was done from library. After that, five rounds of biopanning were done. The strongest enrichment occurred at the third cycle of panning and confirmed the existence of high affinity tetanus antibodies. A total 50 single colonies randomly selected from third cycle of biopanning and 20 clones with strong binding were selected and sequenced.Conclusion: In this study, our aim was the screening of tetanus antibodies by phage display selection method. The antibody fragments isolated from immune libraries applications finds in the diagnostic and treatment tools.