جداسازي باسيلوس هاي سرئوس از مواد غذايي و مطالعه تاثير سايتو توكسيسيته آن ها بر روي سلول هاي Vero

Isolation Of Bacillus cereus from Foods and Studying the Cytotoxicity Of Them on Vero Cells

مقدمه و هدف:باسيلوس سرئوس از مهم ترين باكتري هاي عامل مسموميت غذايي در انسان مي باشد. انتروتوكسين هاي سه جزيي اين باكتري شامل كمپلكس هاي HBLو NHEمي باشد كه از ژن هاي اين كمپلكس مي توان جهت شناسايي سويه هاي بيماري زا استفاده نمود. هدف از اين مطالعه بررسي ميزان شيوع ژن هاي انتروتوكسيژنيك در باسيلوس سرئوس هاي جدا شده از مواد غذايي مختلف  و اثر آن بر روي سلول هاي Veroمي باشد.روش كار:در اين مطالعه، 220 نمونه غذايي شامل 80 فرآورده گوشتي آماده، تعداد 20 نمونه لبنيات شامل شير پاستوريزه و محلي و پنير، خامه و بستني و20 نمونه برنج و100 نمونه سالاد هاي سرو شده در رستوران هاي شهر تبريز و زنجان در بين سال هاي 1393-1391 جمع آوري شده و از نظر آلوده بودن به باكتري باسيلوس سرئوس هم از نظر بيوشيميايي و هم مولكولي بررسي گرديد. سپس سويه هاي حاوي كمپلكس NHEHBLو يا هردو كمپلكس با پرايمرهاي اختصاصي و روش PCRتفكيك شدند. باسيلوس سرئوس­هايي كه هر دو كمپلكس را دارا بودند، جهت بررسي ميزان سايتو توكسيسيتي سلول هاي Veroاستفاده شد.يافته ها:از نمونه هاي غذايي مورد مطالعه، 100 نمونه آلوده به باسيلوس سرئوس بودند كه از اين تعداد 40 جدايه حاويNHE ، 23 نمونه حاوي HBLو 17 نمونه هر دو كمپلكس را نشان دادند. انكوباسيون سلول هاي Veroبا باسيلوس سرئوس هاي حاوي HBLو NHEنشان داد كه اين باكتري ها اثر سايتو توكسيك بر روي آن ها داشته و باعث تغيير شكل و از بين رفتن 80 درصد سلول ها شدند.نتيجه گيري:استفاده از تكنيك و روش سريع PCRبراي تشخيص حضور باسيلوس سرئوس انتروتوكسيژنيك در غذا از اهميت زيادي برخودار است تا از سلامتي غذاي مصرفي اطمينان حاصل شود. افزايش اطلاعات درباره بيماري زايي و شيوع ژن هاي عامل مسموميت مي تواند باعث كاهش مسموميت هاي غذايي گردد.

Inroduction and Objective:Bacillus cereusis an important enterotoxigenic food borne pathogen. It contains NHE and HBL complex  enterotoxins. The genes of these complex can be used for characterization of  enterotoxin production in B. cereus. The objective of this study is to detect enterotoxigenic B. cereus and assessing the incidence of it in foods.Material and Methods:220 food sles including 80 meat products, 20 dairy, 20 rice and 100 salad sles, have been collected in the years 20122014. Using biochemical and molecular tests, the B. cereus positive food sles has been detected. B.cereus isolates checked for NHE and HBL complex by specific primers. B. cereus isolates which contain both NHE and HBL have been used for cytotoxic assay on Vero cells.Results: Among 100 B.cereus isolates, 40 contain NHE, 23 contain HBL and 17 isolates contain both complexes. The recent isolates have been used for cytotoxic assay on Vero cells.Conclusion: PCR is a prompt, reliable method for detection of enterotoxigenic bacteria. Enhancing awareness about virulence and prevalence of genes involved in food poisoning would be effective in prevention of food poisoning.