پديد آورندگان :
آزنده، سعيد نويسنده دانشكده پزشكي- مركز تحقيقات سلولي مولكولي,گروه علوم تشريحي,دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز,ايران , , محمد غراوي، آنه نويسنده دانشكده پزشكي,گروه علوم پايه,دانشگاه علوم پزشكي شاهرود,ايران , , اوراضي زاده، محمود نويسنده دانشكده پزشكي- مركز تحقيقات سلولي مولكولي,گروه علوم تشريحي,دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز,ايران , , هاشمي تبار، محمود نويسنده دانشكده پزشكي- مركز تحقيقات سلولي مولكولي,گروه علوم تشريحي,دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز,ايران , , شايسته، علي اكبر نويسنده دانشكده پزشكي,گروه داخلي,دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز,ايران , , خدادادي، علي نويسنده دانشكده پزشكي,گروه ايمنولوژي,دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز,ايران , , بيژن نژاد، داريوش نويسنده دانشكده پزشكي- مركزتحقيقات سلولي مولكولي,گروه علوم تشريحي,دانشگاه علوم پزشكي جندي شاپور اهواز,ايران ,
كليدواژه :
داربست , تمايز , هيدروژل , بندناف , سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي
چكيده فارسي :
مقدمه: باتوجه به افزايش تقاضا براي پيوند كبد و كمبود اهدا كنندگان عضو، توليد بافت كبد از طريق روش‌هاي مهندسي بافت كبد و كشت سه بعدي مورد بررسي قرار گرفته است. مطالعه حاضر با هدف جداسازي، استخراج و تمايز سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي بند ناف به هپاتوسيت‌ها و ارزيابي ماركرهاي سلولي و بررسي رفتار و عملكرد آنها طراحي گرديدمواد و روش‌ها: سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي از بندناف استخراج و جداسازي شده بررسي ماركرها و فنوتيپ سلول‌هاي بنيادي از طريق فلوسيتومتري انجام شد. سپس در طي يك دوره 14 روزه، سلول‌ها تحت چهار مرحله تمايز با عامل رشد فيبروبلاستي 4(FGF4)، عامل رشد هپاتوسيتي (HGF)، دگزامتازون (DEX)، انسولين-ترانسفرين-سلنيوم (ITS)، گلوكاگون (GLU) انكوستاتين(OSM) و تريكواستاتين (TSA) قرار گرفتند. به‌وسيله اليزا توليد اوره توسط سلول‌ها اندازه‌گيري شد. جهت بررسي بافت‌شناسي تمايز، مقاطع كشت سه بعدي تهيه شده، به‌وسيله روش هماتوكسيلين/ ائوزين رنگ‌آميزي شد.نتايج: سلول‌هاي حاصل از ژله وارتون ماركرهاي سطحي مزانشيمي مانند CD73 را نشان داند اما اين سلول‌ها فاقد ماركرهاي سطحي سلول‌هاي خونساز مانند CD31 بودند. پس تمايز چند مرحله‌اي سه بعدي، مورفولوژي سلول‌ها گرد شده، در داربست آلژيناتي تجمعات سلولي به‌دليل نزديك شدن سلول‌ها ديده شد. مقادير اوره در هر دو كشت سه بعدي و دو بعدي به‌طور معني‌داري در الگوي وابسته به زمان افزايش يافت. مقادير اوره در كشت سه بعدي نسبت‌به كشت دو بعدي بيشتر بود (001/0P=). با بررسي بافت‌شناسي مقاطع دركشت سه بعدي بافتي پرسلول با دستجات و صفحات سلولي با هسته يوكروماتين ديده شد.نتيجه‌گيري: نتايج اين مطالعه نشان داد كه تمايز 4 مرحله‌اي سلول‌هاي بنيادي با استفاده از داربست هيدروژلي باعث ظهور ويژگي‌هاي عملكردي و مورفولوژيكي سلول‌هاي هپاتوسيتي مانند ترشح اوره و ايجاد صفحات سلولي شبه كبدي مي‌گردد.
چكيده لاتين :
Introduction: Due to increasing demand for liver tissue engineering, three-dimensional (3D) liver cells culture techniques have been proposed. Therefore, the aim of the present study was to examine the cells isolation and expansion of umbilical cord derived mesenchymal stem cells and in vitro 2D and 3D hepatocyte differentiation.Alsofunctional characteristics of hepatocytes were analyzedMethods: The study performed in several phases. In the first umbilical cord derived mesenchymal stem cells obtained and isolated, thereafter cellss expanded. Determination of Immunophenotype using Flow. Cytometry performed by DAKO – Galaxy Hepatic differentiation UC-MSCs was performed by four step sequential method using FGF-4, ITS, HGF, dexamethasone, glucagon, OSM and TSA. Urea production was quantified by ELISA.Section of tissue constructs stained with hematoxyllin and eosin for histological examinationResults: MSCs isolated from umbilical cord expressed mesenchymal surface antigen such as CD73, but were negative against CD31. Several cell clusters mainly between the round cells were observed in alginate scaffold after 3d differentiation. Urea production was increased time- dependable and was significantly higher in the experimental group of 3D culture (P=0.001). Tissue construct of 3D culture revealed multicellular tissue with several euchromatin cell plates.Conclusion: The finding of the present study indicated that four step differentiation of umbilical cord derived mesenchymal stem cells within hydrogel scaffold induced functionally and morphologically characteristics of hepatocytes such as urea production and cell plates.
