آناليز ايمنوهيستوشيمي ‬تاثير عصاره پلاكتي بر روي آسيب كبدي القا شده با تتراكلريد كربن در موش‬هاي صحرايي نر بالغ

Immunohistochemical Analysis of Platelet Extract Effects on Liver Injury Induced by CCl4 in Male Rats

زمينه و هدف: آسيب كبدي منجر به تجمع فراوان ماتريكس خارج سلولي شده كه روي عملكرد كبد در درازمدت تاثير گذاشته و آن را از كار مي اندازد. فاكتورهاي رشد موجود در عصاره پلاكتي مقرون به صرفه، در دسترس و بسيار پايدارتر از فاكتورهاي رشد نوتركيب هستند. در اين مطالعه براي مشخص شدن چگونگي اثرات عصاره پلاكتي روي تغييرات بافتي در كبد آسيب‬ديده با تتراكلريدكربن از آناليز ايمنوهيستوشيمي در رت‬هاي نر بالغ استفاده گرديد. روش كار: براي انجام اين پژوهش از 28 سر موش صحرايي نر بالغ با نژاد ويستار با وزن تقريبي 300250 گرم استفاده شد كه به صورت تصادفي در چهار گروه 7 تايي تقسيم شدند.گروه اول شم كه در طول آزمايش تنها روغن زيتون را به عنوان حلال تتراكلريد كربن به صورت درون صفاقي دريافت كردند، گروه دوم تتراكلريدكربن كه آن را دو بار در هفته به مدت هشت هفته به صورت محلول در روغن زيتون )به نسبت 1:1( به ميزان 1 ميلي ليتر/كيلوگرم به صورت درون صفاقي دريافت كردند، گروه سوم كه عصاره پلاكتي را به تنهايي به مدت سه هفته دو بار در هفته به ميزان 5/0 ميلي ليتر/ كيلوگرم به صورت زير جلدي دريافت كردند و گروه چهارم كه علاوه بر اينكه تتراكلريدكربن را به مدت هشت هفته به صورت درون صفاقي دريافت كردند، عصاره پلاكتي را نيز سه هفته آخر به صورت زيرجلدي دو بار در هفته دريافت كردند. بعد از هشت هفته از رت‬ها نمونه خون جهت آزمايش‬هاي آنزيمي و بافت كبد جهت بررسي‬هاي بافت شناسي و ايمنوهيستوشيمي فراهم شده و به آزمايشگاه منتقل گرديد. داده هاي حاصل با استفاده از تست هاي آماري توكي و آنواي يك طرفه توسط برنامه آماري گرف پد ويرايش پنجم مورد ارزيابي قرار گرفت و P < 0.05 معني دار در نظر گرفته شد. يافته ها: نتايج حاصل از آزمايش‬ها نشان داد كه عصاره پلاكتي كاهش قابل ملاحظه اي ( P < 0.001 ) را درآنزيم هاي كبدي ايجاد مي كند و با افزايش ميزان آلبومين ( P < 0.05 ) منجر به بهبود عملكرد آن مي‬گردد و با تجويز عصاره پلاكتي ميزان اكتين آلفاي ماهيچه صاف به عنوان شاخصي براي فعاليت سلول‬هاي ستاره اي كبد كاهش پيدا كرد كه در نهايت نكروز و فيبروز را در مدل حيواني موش‬هاي صحرايي القا شده با تتراكلريدكربن كاهش داد. نتيجه گيري: شواهد نشان داد كه عصاره پلاكتي از طريق كاهش ميزان شاخص اكتين آلفاي ماهيچه صاف كه شاخص فيبروز كبدي است، منجر به بهبود عملكرد كبد آسيب ديده شد.

Backgrounds objectives: Liver damage results in a large accumulation of external cellular matrix that affects the function of this important body organ in a long term and finally stops its function completely. The growth factors existing in platelet extract are more costeffective, available, and stable than recombinant ones. To determine whether the platelet extract effects on histological changes in liver injury induced by carbon tetrachloride (CCl4), we used immunohistochemical analysis in male rats. Methods: In this project the 28 male Wistar rats (250300 g) were randomly divided into 4 groups, each consisting of 7 animals. The rats were divided into four experimental groups as follows: the first group (sham) intraperitoneally received only olive oil as the solvent of carbon tetrachloride second group (CCl4) intraperitoneally received carbon tetrachloride dissolved in olive oil (ratio of about 1: 1) at a concentration of 1 ml/kg and a twice a week for eight weeks third group subcutaneously received only platelet extract at a concentration of 0.5 ml/kg twice a week for three weeks and fourth group received both CCl4 intraperitoneally for eight weeks and platelet extract subcutaneously for last three weeks. After 8 weeks of trial blood and liver sling were done. Blood sles sent for enzymatic (AST, ALT) tests and liver sles tested for histological and immunohistochemical studies. The data were analyzed using oneway ANOVA followed by Tukey test by Graph pad Prism 5 software and data were considered significant at ple 0.05. Results: The results show that platelet extract causes a significant (ple 0.001) decrease in liver enzymes and albumin improves the function of liver. The level of alfa smooth muscle actin (alpha SMA) as an index of hepatic stellate cell activation was decreased by platelet extract administration which eventually reduced the necrosis and fibrosis induced by carbon tetrachloride in studied rats