تعيين توالي و كلونينگ ژن زايلناز باكتري Anoxybacillus flavithermus از چشمه آب گرم قينرجه ، مشكين شهر

زايلنازهاي مقاوم به گرما و قليا آنزيم هاي صنعتي مهمي به شمار مي روند. اين آنزيم ها در صنايع غذايي (نانوايي و الكل سازي)، خمير كاغذ و داروسازي كاربرد فراواني دارند. زايلنازها قابليت هيدروليز زايلان (همي سلولز موجود در ديواره سلولي) را دارند و توسط گونه هاي مختلفي از ميكروارگانيسم ها مانند باكتري ها، قارچ ها و برخي جلبك­ها توليد مي شوند. در اين مطالعه، ژن زايلناز از يك باكتري مقاوم به قليا و گرما به نام Anoxybacillus flavithermus چشمه آب گرم قينرجه در مشكين شهر جداسازي و در باكتري E. coli سويه BL21 كلون شد. در ابتدا، ژنوم باكتري استخراج و با انجام واكنش PCR، ژن زايلناز جداسازي و تكثير و سپس از طريق الكتروفورز، تكثير ژن زايلناز تاييد شد. كلونينگ با هضم آنزيمي ژن زايلناز و وكتور pET21a+ با استفاده از آنزيم هاي محدودگر NheI و XhoI، الحاق و انتقال وكتور نوتركيب به باكتري E. Coli سويه BL21 انجام شد. پرايمرهاي تخصصي پيشرو و معكوس با سايت برش براي آنزيم هاي NheI و XhoI طراحي شد و ژن با روش PCR تكثير و سپس جهت كلونينگ، ترانسفورم شد. در نهايت، نتيجه كلونينگ از طريق انجام Colony-PCR و تعيين توالي ژن كلون شده تاييد شد. نتايج حاصل از آناليز توالي ژن كلون شده و Colony-PCR، حاكي از تشابه ژن مورد نظر با زايلنازهاي سويه هاي مختلف Anoxybacillus flavithermus بود.