بررسي آلودگي شير خام به باكتري بروسلا با روش واكنش زنجيره‌اي پلي‌مراز

Brucella contamination in raw milk by polymerase chain reaction

زمینه و هدف: تب مالت در بسیاری از كشورهای خاورمیانه مانند ایران یك مشكل مهم بهداشت عمومی محسوب می‌شود. در كشورهای در حال توسعه، آلودگی شیر به گونه‌های باكتری بروسلا اصلی‌ترین راه انتقال بیماری در انسان محسوب می‌شود. استاندارد طلایی تشخیص بروسلوز، جداسازی باكتری‌های گونه بروسلا می‌باشد، اما برای این منظور نیاز به تجهیزات با سطح ایمنی زیستی (Biosafety level) سه و مهارت بالا و گذر زمان طولانی است. برای چیرگی بر این مشكلات از روش حساس و با اختصاصیت بالای واكنش زنجیره‌ای پلی‌مراز (PCR) استفاده می‌شود. هدف از انجام این پژوهش ردیابی باكتری‌های گونه بروسلا در شیر تحویلی دامداری‌های اطراف شهر كرمان به یكی از كارخانه‌های مهم كرمان با روش واكنش زنجیره‌ای پلی‌مراز است. روش بررسی: در این مطالعه مقطعی كه از مهر تا اسفند 1394 انجام گرفت، از 48 گله گاو شیری مشتمل بر 4200 گاو كه شیر خود را تحویل یكی از بزرگترین كارخانه‌های جنوب شرق ایران می‌دادند، نمونه‌های جداگانه تهیه گردید. اسید نوكلییك نمونه‌ها با روش بافر لیز‌كننده و پروتییناز K استخراج گردید سپس با استفاده از پرایمر جنس بروسلا، ژن IS711 برای بودن اسید نوكلییك بروسلا در شیر با روش واكنش زنجیره‌ای پلی‌مراز مورد بررسی قرار گرفت. در نمونه‌های مثبت قطعه‌ای به اندازه 317 جفت باز از ژنوم باكتری‌های گونه بروسلا تكثیر می‌یافت. یافته‌ها: چهار نمونه (3/%8) از مجموعه 48 نمونه شیر مخزن از 4200 گاو شیری از نظر وجود ژنوم باكتری‌های گونه بروسلا در شهر كرمان مثبت گردید. نتیجه‌گیری: نتایج گویای اندمیك بودن بروسلوز در گله‌های گاوی شیری در شهر كرمان می‌باشد.

Background: Human brucellosis is a significant public health problem in many middle east countries including Iran. Brucella organisms, which are small aerobic, facultative intracellular coccobacilli, localize in the reproductive organs of host animals, causing abortions and sterility. They are shed in large numbers in the animal’s urine, milk, placental fluid, and other fluids. Dairy product from raw milk are a potential threat to public health in endemic developing countries. The gold standard for the diagnosis of brucellosis is isolation of Brucella species. However, isolation Brucella species is time consuming and needed to level 3 biocontainment facilities and highly skilled technical personnel to handle samples and live bacteria for eventual identification. Handling Brucella species increase risk of laboratory infection. Polymerase chain reaction (PCR) with high sensitivity and specifity overcomed to these disadvantages. The aim of this study was to detect Brucella species in milk from dairy cattle farms in Kerman province, Iran by PCR technique. Methods: Forty and eight bulk tank milk (BTM) were collected from October 2015 to March 2016 from 48 dairy cattle farm including 4200 cows. DNA of milk samples extracted by lysis buffer and proteinase K method. All milk samples were examined by PCR to detect Brucella-specific DNA targeting IS 711. Positive samples must be showed 317 bp amplified, corresponding to the expected size of the IS 711 genome region in all Brucella species. Results: Using IS711 primer were detected in 4 samples (8.3%) Brucella spp. from 48 BTM samples in this area. Conclusion: The results indicate that brucellosis by Brucella species is endemic in the Kerman province dairy farms. Consumption of raw milk dairy products by individual farmers operating under poor hygienic conditions represents an high risk to public health. The need for implementing control measures and raising public awareness on zoonotic transmission of brucellosis are recommended. Vaccination of cattle is recommended for control of bovine brucellosis in enzootic areas with high prevalence rates.