بررسي اثر Chir99021 بر تكثير سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي جدا شده از مغز استخوان جنين گوسفند

Evaluation of the effect of Chir99021 on proliferation of ovine fetal mesenchymal stem cells isolated from bonemarrow

هدف: هدف از مطالعه ي حاضر بررسي اثر غلظت هاي متفاوت Chir99021 بر تكثير آزمايشگاهي سلول‏هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان (BoneMarrow Mesenchymal Stem Cells; BMMSCs) جنين گوسفند است. مواد و روش‏ها: MSCs از مغز استخوان جنين گوسفند جداسازي و كشت داده شد. پتانسيل تمايز اين سلول‏ها به سلول‏هاي استخوان و چربي، در پاساژ سوم بررسي شد. در اين مطالعه، BMMSCs ي جنين گوسفند با غلظت هاي متفاوت 0، 5/0، 1، 5/1، 3، 5 ميكرومولار Chir99021 كشت داده شدند. در طول دوره ي كشت، سلول‏ها از نظر تعداد كلوني، دوبرابر شدن جمعيت سلولي و زمان دو برابر شدن، زنده ماني سلولي مورد بررسي قرار گرفتند، علاوه بر اين، بيان ژن بتاكاتنين مورد ارزيابي قرار گرفت. كشت بدون Chir99021 به‏عنوان گروه شاهد در نظر گرفته شد. نتايج: يافته هاي ما نشان داد كه افزودن غلظت هاي 5/0 و 1 ميكرومولار Chir99021 به محيط كشت در مقايسه با دوزهاي 5 ميكرومولار Chir99021 و گروه شاهد به صورت معني داري تكثير را افزايش داده بودند )05/0> p). علاوه براين، پنج روز بعد از تيمار با اين ريز مولكول، نتايج نشان دادكه تيمارهاي 5/0 و 1 تعداد كلوني بيشتري در مقايسه با تيمارهاي كنترل و 5 ميكرومولار Chir99021 تشكيل داده اند. بيان بتاكاتنين در گروه مكمل شده با 1 ميكرومولار در مقايسه با گروه‏هاي دريافت كننده ي غلظت هاي 5/0 و 5/1 به‏صورت معني داري بالاتر بود )05/0> p). نتيجه گيري: نتايج حاصل از اين تحقيق نشان داد، به‏كارگيري غلظت 1 ميكرومولارChir99021 سبب افزايش تكثير آزمايشگاهي BMMSC هاي جنين گوسفند شده است اما به‏كارگيري غلظت هاي بالاي اين تركيب اثرات سمي بر تكثير اين سلول‏ها دارد.

Aim: The aim of the present study was to evaluate the effects of different concentrations of Chir99021 on ovine fetal marrowderived mesenchymal stem cells (BMMSCs) expansion in culture.  Material and Methods: BMMSCs were isolated from ovine fetal and cultured. Passaged3 cells were examined for their differentiation potential into osteocytes and adipocytes. In the present study, BMMSCs from ovine fetal were plated in the presence of 0, 0.5, 1, 1.5, 3 and 5 μM of Chir9902. During the cultivation period, the cultures were statistically compared in terms of induces of cell growth including the number of colonies, population doubling number (PDN), doubling time (DT) and the number of viable cells. Furthermore, expression of the betacatenin was evaluated. The culture without Chir99021 was taken as the control group.  Results: Our findings indicated that, addition of 0.5 and 1 µM of Chir99021 to medium significantly improved overall proliferation compared to that of control group as well as 5µM of Chir99021(plt;0.05). Furthermore, Five days after treatment with small molecule showed that the treatments with 0.5 and 1 µM Chir99021 formed higher Colony Forming UnitFibroblast (CFUF) compared to control and 5 µM of Chir99021. The expression of betacatenin was significantly higher in culture supplemented with 1 μM of Chir99021 compared to that in groups containing 0.5 and 1.5 μM (plt;0.05). Conclusion: In conclusion, using Chir99021 at concentration of 1 μM could enhance in vitro proliferation of ovine fetal BMMSC; however administration of high concentration of this small molecule had toxic effects on these cells proliferation.