ارزيابي آنتي‌بادي توليد شده عليه ليپو پلي‌ساكاريد ويبريو كلرا به منظور تشخيص سريع وبا

Evaluation of Antibodies Produced against Lipopolysaccharides of Vibrio cholerae for Rapid Detection of Cholera

هدف: ايران يكي از كانون‌هاي بومي وبا بوده و تشخيص سريع به‌ويژه در مواقع طغيان بيماري، اهميت حياتي دارد. استفاده از آنتي‌بادي عليه اجزاي ليپو پلي‌ساكاريد يكي از روش‌هاي مهم تشخيص باكتري است. هدف اين مطالعه، استخراج و تخليص ليپو پلي‌ساكاريد ويبريو كلرا و ارزيابي آنتي‌بادي پلي‌كلونال توليد شده عليه آن به منظور تشخيص وبا ‌است. مواد و روش‌ها: ويبريو كلرا تهيه و در محيط عصاره تريپتون كشت داده شد. ليپو پلي‌ساكاريد به روش فنل داغ-آب، استخراج، تخليص و دياليز شد و ميزان پروتيين، قند، خلوص، و فعاليت زيستي آن اندازه‌گيري شد. براي توليد آنتي‌بادي، ابتدا باكتري كشته شده همراه با ادجوانت كامل به خرگوش تزريق شد و سپس طي سه نوبت، ليپو پلي‌ساكاريد همراه با ادجوانت ناقص فروند تزريق شد. پس از تزريق آخرين يادآور، خون‌گيري به عمل آمد و ميزان آنتي‌بادي عليه پيكر سروتيپ‌هاي اينابا، اگاوا باكتري، عليه ليپو پلي‌ساكاريد سروتيپ‌هاي اينابا و اگاوا و عليه چندين باكتري مشابه ديگر با روش الايزا تعيين شد. نتايج: ميزان پروتيين در ليپو پلي‌ساكاريد تخليص شده در حد صفر، قند آن 5/0 ميلي‏گرم/ ميلي‏ليتر، تيتر فعاليت آن 1024 و داراي سه باند 2/5، 4 و 14/5 كيلودالتوني بود. آنتي‌بادي‌هاي تهيه شده در خرگوش، قادر به شناسايي باكتري سروتيپ اگاوا و اينابا و همچنين ليپو پلي‌ساكاريد خالص بود. آنتي‌سرم عليه سروتيپ اگاوا و اينابا قادر به واكنش متقاطع عليه يكديگر بودند اما با ساير گونه‌هاي ويبريو و نيز ساير باكتري‌ها واكنش نشان ندادند. تيتر آنتي‌بادي عليه ليپو پلي‌ساكاريد براي سروتيپ اگاوا 1:32000 و براي سروتيپ اينابا 1:16000 بود. نتيجه‌گيري: با توجه به هزينه كم توليد و حساسيت بالا و نظر به اهميت و لزوم تشخيص بيماري وبا در كشور، مي‌توان از آنتي‌سرم توليد شده در اين مطالعه به‌عنوان ابزار تشخيص اوليه در تشخيص وبا و افتراق سويه‌هاي 01 از غير 01 در غالب آزمون‌هاي ايمنولوژي استفاده نمود.

Objective: Cholera is an endemic disease in Iran. Early detection, especially in times of disease outbreaks, is of vital importance. The antibody against the lipopolysaccharide (LPS) is an important method for bacterial detection. This study intends to extract and purify the LPS of Vibrio cholerae and evaluate the cholera antibody for detection purposes. Methods: Vibrio cholerae was cultured in tryptone extract medium. LPS was extracted by the hot phenol water method, purified, and dialyzed. We measured the LPS protein and sugar content, purity, and biological activity. Antibodies were produced by injection of the killed bacteria with Freundʹs complete adjuvant into rabbits and then the LPS was injected three times with Freundʹs incomplete adjuvant. After the last booster, blood samples were taken. We used ELISA to determine the antibody titers against the Inaba and Ogawa serotypes, the LPS of these serotypes, and several other similar bacteria. Results: The amount of protein in the purified LPS was approximately zero and sugar was 0.5 mg/ml. The LPS had a titer activity of 1024, and consisted of three bands (5.2, 4, and 5.14 KD). Antibodies produced by the rabbits identified the bacterial Inaba and Ogawa serotypes, and the purified LPS. Ogawa and Inaba serotypes cross-react with each other but not with other species of Vibrio and other bacteria. The LPS antibody titer against the Ogawa serotype was 1:32000, whereas for Inaba it was 1:16000. Conclusion: Due to the low cost of production, high sensitivity, and importance of cholera diagnosis in Iran, the antiserum produced in this study can be used as a tool for early screening of cholera and discrimination of O1 strains from non-O1 strains in immunologic tests.