انتقال ژن fld سيانوباكتريايي به گياه برنج به روش اگرو باكتريوم

تنش هاي غيرزنده مانند خشكي، شوري، دماي بالا، سميت شيميايي و تنش اكسيداتيو تهديدات جدي براي كشاورزي محسوب شده و اثرات نامطلوبي بر رشد و باروري گياهان بر­جا مي­گذارند. در اين تحقيق به منظور انتقال ژن fld سيانوباكتريايي به گياه برنج به روش اگروباكتريوم از سويه EHA105 و حامل پلاسميد p6-ubi استفاده شد. اين ناقل حاوي ژن نشانگر باكتريايي مقاومت به استروپتومايسين، نشانگر گياهي مقاومت به هيگرومايسين و ژن فلاودكسين (fld) است. فلاودكسين نقشي مشابه فرودكسين (fd) در گياه ايفا كرده و هنگام وقوع تنش­هاي غير­­زيستي با جلوگيري از وقوع اغتشاشات و بي­نظمي­­هاي موجود در چرخه انتقال الكترون و ايجاد فرم­هاي فعال اكسيژن به صورت آنتي اكسيدان عمل كرده و تحمل گياه را افزايش مي­دهد. در اين تحقيق كالوس­هاي جنين­زاي برنج رقم هاشمي كه بافت هدف به­شمارمي­روند، در انتقال ژن مورد استفاده قرار گرفت. پس از انجام مراحل تراريختي، كالوس­هاي تراريخت احتمالي به محيط باززايي حاوي 2/0 ميلي گرم بر ليتر اسيد نفتالين استيك، 2 ميلي گرم بر ليتر كاينتين و 50 ميلي­گرم بر ليتر هيگرومايسين منتقل شدند. براي ريشه زايي نيز از محيط ريشه زايي حاوي 2/0 ميلي گرم بر ليتر اسيد نفتالين استيك استفاده شد. گياهان باززايي شده به لوله هاي حاوي محلول يوشيدا منتقل شدند. آناليز واكنش زنجيره اي پلي مراز (PCR) براي گياهان تراريخت احتمالي با استفاده از پرايمرهاي fld نشان داد كه اين گياهان حداقل يك نسخه از ژن را دارا هستند. آناليز PCR براي ژن virG نشان داد كه تعدادي از گياهان تراريخت، فاقد آلودگي اگروباكتريومي هستند. در حال حاضر گياهان تراريخت حاصل در گلخانه براي توليد بذر نگهداري مي­شوند.