شناسايي قارچ‏هاي عامل لكه برگي در علف هرز سوروف (Echinochloa crus-galli) در شاليزارهاي مازندران

Identification of the fungal pathogens causing leaf spot on barnyardgrass (Echinochloa crus-galli) in rice paddy fields of Mazandaran

سوروف، مهم‏ترين علف‌هرز شاليزاري شمال كشور محسوب مي‎شود. به منظور شناسايي عوامل قارچي ايجاد كننده لكه برگي در اين علف هرز، نمونه‏برداري از بوته‏هاي بيمار، در مزارع برنج مازندران انجام شد. قطعات كوچكي از برگ‏هاي داراي علايم لكه برگي از حد فاصل بافت سالم و آلوده تهيه شد. نمونه‏ها درمحيط كشت آگار 2% و يا سيب زميني دكستروز آگار + سولفات استرپتومايسين كشت شد. پرگنه‏هاي رشد يافته در دماي 25 درجه سلسيوس با روش تك اسپور يا نوك هيف خالص شد. براي اثبات بيماري‏زايي قارچ‏ها، از دو روش مايه‏زني روي برگ‏هاي بريده در تشتك پتري و پاشش سوسپانسيون كنيديومهاي قارچ روي بوته‏ها در گلخانه استفاده شد. براي شناسايي مورفولوژيكي جدايه‏هاي بيمارگر از كليدهاي شناسايي معتبر استفاده شد. همچنين، براي شناسايي مولكولي، دي.اِن.اِي ژنومي قارچ‏ها استخراج و ناحيه ITS آن‏ها تكثير شد. پس از توالي‏يابي اين ناحيه نسبت به اخذ رَس‏شمار و ارزيابي همولوژي آن با توالي‏هاي موجود در بانك ژن به كمك ابزار جستجوي BLAST انجام شد. در مجموع، با استفاده از صفات مورفولوژيكي و مولكولي، گونه‏هاي بيماري‏زاي شناسايي شده ايجاد كننده لكه برگي عبارت بودند از Alternaria alternata،Bipolaris oryzae ، Bipolaris sorokiniana، Curvularia lunata و Rhizoctonia solani.

Barnyardgrass is the most important weed in paddy fields of northern Iran. In order to identify the fungal pathogens causing leaf spot on this dominant weed, symptomatic plants were collected from rice fields in different areas of Mazandaran province. Leaf pieces of ca 0.5×0.5 cm from the margins of diseased spots were surface sterilized in 0.5% sodium hypochlorite and washed with sterile distilled water. The pieces were placed on WA 2% or PDA supplemented with streptomycin sulfate. All Petri dishes were incubated at 25°C in darkness. The grown fungal colonies were isolated and purified using single spore or hyphal tip methods. To determine their pathogenicity, detached-leaf assay and spraying spore suspension on whole plants in greenhouse were used. The fungal isolates which caused symptoms, considered for further studies. Morphological identification of pathogenic isolates was performed using standard keys and monographs. In addition, genomic DNA was extracted and ITS region was amplified. The resulting sequences were submitted to NCBI GenBank and BLAST search was done to find the most similar sequences. Based on morphological and molecular data, the identified fungal leaf spot pathogens were Alternaria alternata, Bipolaris oryzae, Bipolaris sorokiniana, Curvularia lunata and Rhizoctonia solani.