بررسي فراواني ايزوله هاي مايكوباكتريومهاي غير توبركلوزيس، جدا شده از بيماران مراجعه كننده به مركز سل دانشگاه علوم پزشكي كاشان

Prevalence of non-tuberculous mycobactera isolated from patients referring to tuberculosis center of Kashan University of Medical Sciences.

چكيده زمينه و هدف: امروزه اهميت بيماريزايي مايكوباكتريوم هاي غيركلوزيس (Non-Tuberculosis Mycobacterium) براي انسان مشخص گرديده است. بطور كلي اين گروه علاوه بربيماريزايي در دستگاه تنفس، از قدرت بيماريزايي درغدد لنفاوي، پوست، بافت نرم، استخوان ها برخوردار است. تعيين هويت مايكوباكترياها بر اساس كشت و تستهاي بيوشيميايي هفته ها طول ميكشد و درتشخيص قطعي به ما كمك نمي كند. تكنيك PCR-RFLP (PRA ) از ژن hsp65 بااستفاده از آنزيمهاي HaeIII و BstEII يك روش افتراق گونه اي دقيق بوده و نسبت به روش هاي فنوتيپي از دقت و سرعت بالاتري برخوردار است. همچنين يك روش سريع و ارزان براي تشخيص گونه هاي مايكوباكتريايي ميباشد.اين مطالعه با هدف تعيين فراواني ايزوله هاي مايكوباكتريوم غير توبركلوزيس ، جدا شده از بيماران مراجعه كننده به مركز سل انجام شد. روش بررسي: مطالعه بر روي 106 بيمار ، مراجعه كننده به مركز سل دانشگاه علوم پزشكي كاشان، در طول سالهاي 91 تا 94 انجام گرفت. ابتدا نمونه ها از نظر وجود تست هاي تشخيصي بيوشيميايي مورد آزمون قرار گرفتند. همزمان تعيين هويت آن سويه ها با روش PRA انجام گرفت. سپس قطعه 441 جفت بازي Heat Shock Protein 65 (hsp65) با روش PRA تكثير شد.سپس محصولات PCR با دو آنزيم HaeIII و BsteII هضم گرديد و آناليز بر اساس الكتروفورز انجام گرديد. يافته ها: بر اساس آزمايشات مولكولي از ميان 106 نمونه باليني، (8/3%) 4 نمونه خلط مربوط به مايكوباكتريوم هاي غير توبركلوزيس بودند.كه شامل يك نمونه Mycobacterium abscessus، يك نمونه Mycobacterium senegalense، يك نمونه Mycobacterium fortuitum و يك نمونه Mycobacterium kansasii بودند. نتيجه گيري: نتايج مطالعه حاضر نشان داد كه برخي از موارد بيماري سل در شهر كاشان ناشي از مايكوباكتريوم هاي غير توبركلوزيس مي باشد. همچنين استفاده از روش PRA مبتني بر ژن hsp65 مستقيما بر روي نمونه هاي باليني، علاوه بر تسريع تشخيص با تعيين دقيق گونه هاي مايكوباكتريوم كمك شاياني در تشخيص، درمان و كنترل صحيح بيماري سل مي نمايد. كلمات كليدي: مايكوباكتريوم توبركلوزيس كمپلكس، مايكوباكتريوم غير توبركلوزيس، PRA، hsp65

ABSTRACT Background and Aim: Nowadays, the importance of pathogenicity of non-tuberculosis mycobacteria is well known. Generally, this group, in addition to the respiratory system can cause lymph nodes, skin, soft tissue and bone disorders. Identification of Mycobacterium by culture and biochemical tests may take several weeks and may not be useful for definitive diagnosis. PCR-RFLP (PRA) technique of the hsp65 gene using HaeIII and BstEII enzymes is a precise method for species differentiation, in comparison to phenotypic methods. It is a quick and inexpensive method for detection of mycobacterial species. This study aimed to assess the prevalence of non-tuberculous mycobacteria isolated from the patients referring to tuberculosis center (TB) of Kashan University of Medical Sciences. Material and Method: The study included 106 patients who had been referring to TB Center of Kashan University of Medical Sciences, from 1391 to 1394. The samples were tested by biochemical diagnostic tests. At the same time identification of the strains was made by use of PRA. Amplification of 441-bp fragment was performed by PRA for detection of hsp65 gene. The PCR products were digested with HaeIII and BsteII enzymes and analysis was performed on the basis of electrophoresis. Results: Molecular analysis showed non-tuberculosis mycobacteria in 4(8.3%) sputum samples,i.e. one positive sample (o.9 %) for every one of the following strains: M. abscessus, M. senegalense, M. fortuitum and M.kansasii. Conclusion: The results of this study showed that some cases of tuberculosis in Kashan are due to non-tuberculosis mycobacteria. Also use of PRA analysis of hsp65 gene for clinical specimens is a rapid and useful tool for identification of species of mycobacterium which is helpful for early diagnosis, treatment and control of tuberculosis. Keywords: Mycobacterium tuberculosis complex, Non-tuberculosis mycobacteria, PCR-RFLP ، hsp65.