توليد گياهان كامپوزيت تراريخت خارج شيشه‌اي در گياه دارويي شيرين‌بيان (Glycyrrhiza glabra) به واسطه اگروباكتريوم رايزوژنز به عنوان روشي نوين

Ex vitro Production of Transgenic Composite Plants in Glycyrrhiza glabra via Agrobacterium rhizogenes-mediated Transformation as a New Method

مقدمه: شيرين‌بيان با نام علمي Glycyrrhiza glabra از خانواده لگومينوز مي‌باشد كه از مشهورترين گياهان دارويي در جهان است و به شكل گسترده‌اي در پزشكي، داروسازي، صنايع قنادي و بهداشتي مصرف مي‌شود. قسمت‌هاي مورد استفاده آن ساقه‌هاي زيرزميني و ريشه‌هاي گياه است كه داراي تركيبات مختلفي است، از جمله مهم‌ترين اين مواد، تركيبي به نام گليسريزين است. هدف: پژوهش حاضر با هدف انتقال ژن ريشه‌زايي از طريق آگروباكتريوم رايزوژنز به روش خارج شيشه‌اي و به منظور توليد انبوه ريشه‌هاي مويي در شيرين‌بيان اجرا شد. روش بررسي: آزمايش در قالب طرح كاملاً تصادفي با پنج تيمار در سه تكرار اجرا شد. ابتدا ريشه‌ي گياهچه‌هاي جوان حاصل از كشت بذور حذف شده و گياهچه‌هاي برش داده‌ شده از قسمت هيپوكوتيل داخل پشم‌سنگ حاوي سوسپانسيون باكتري قرار گرفتند. پس از 10 تا 14 روز از تلقيح با اگروباكتريوم رايزوژنز ريشه‌ها از داخل مكعب خارج شدند. درصد القاي ريشه توسط چهار سويه باكتري (ATCC15834، GMI 9534، A4 و A13) همراه با شاهد بررسي شد. نتايج: نتايج تست PCR با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي بر روي ريشه‌هاي حاصل از گياهان كامپوزيت (تراريخت احتمالي) نشان داد كه سه سويه A4، A13 و GMI 9534 به ميزان 100 درصد و سويه ATCC 15834 به ميزان 66/66 درصد ريشه تراريخت توليد نموده‌‌اند. نتيجه‌گيري: لذا توليد گياه كامپوزيت شيرين‌بيان به دليل كم هزينه، سريع و ساده بودن مورد توجه مي‌باشد.

Jouma! of Me-Jicinal Plants Ex vitro Production of Transgenic Composite Plants in Glycyrrhiza glabra via Agrohacterium rhizogenes-mediated Transformation as a New Method Zcbarjadi AR (Ph.0.{2ʹ, Safari M (M.Sc.) 1 Cheghamirzn K (lʹh.0.) 1 1- Agronomy and PlatH Breeding Department, Faculty of Agriculture. R::tzi University, Kermanshah, lran 2•- Biotechnology for Drought Tolerance Research Department, Razi University, Kermanshah, lran ʹʹʹCorresponding ttuthor: Agronomy anJ Piant Breeding Department, Faculty of Agriculture, Rnzi University, Kermanshah, Irnn Tel: 98- 83- 3833!726. Fax: +98- 83- 3832!083 Email: ze-barjaJia li@y;thoo.r:otn Abstract Background: Licorice, Glycyrrhiza glabra (belong to Lcguminosae family) is one of the most popular medicinal plants in the world and it is widely used in many fields such as medical, pharmaceutical, confectionery and health industries. nifferent parts of licorice (shoots, leaves and roots) were had various components such as Glycyrrhzin that was used for some proposes. Objective: The current study was done with the aim of gene transfer via Ar < robacterium rhizogenes by ex vitro method for hairy root production in licorice. 1\lethods: The experiment was laid out as • completely randomized design (CRO) with five treatments in three replications. At first, root of young plantlcts was eliminated and excited plantlcts were pulled in the glass wool contain suspension of bacteria. After 10 to 14 days of inoculation with Agrobacterium rhizogenes, the roots were appeared. The percentage of root induction by four strains of Agrobacterium (ATCC 15834, GMJ 9534, A4 and A13) with check (without bacteria) was investigated. Results: The results of PCR analysis with specific primers for roots of composite plants (putative transgenic) was shown that three strains of bacteria (A4, A13 and GMI 9534) and strain ATCC 15834, were produced 100% and 66.66% transgenic roots respectively. Conclusion: Thus, production of composite licorice plants was remarked due to it has low cost, fast and simple. Keywords; G{vcyrrhiza glabra, Agrobacterium rhizogenes, Composite plant, Hairy root