جداسازي و شناسايي فيلوژنتيكي باكتري هاي بومي نفت خوار از خاك منطقه كارون اهواز

Isolation and phylogenetic analysis of indigenous oildegrading bacteria from soil of Karoon area in Ahvaz

سابقه و هدف: زيست پالايي روشي مقرون به صرفه و پاك به منظور تيمار مكان هاي آلوده است و مي تواند منجر به معدني شدن هيدروكربن ها گردد. ميكروب هاي بومي موجود در منطقه مي توانند نقش مؤثري در اين رابطه ايفا نمايند. اين مطالعه با هدف جداسازي و شناسايي فيلوژنتيكي باكتري هاي بومي نفت خوار از خاك منطقه كارون اهواز انجام شد. مواد و روش ها: خاك آلوده به نفت منطقه كارون اهواز به صورت تصادفي و در شرايط استريل نمونه برداري شد. مقدار فسفر قابل جذب با استفاده از روش اولسن و مقادير كربن، هيدروژن و نيتروژن توسط دستگاه CHN meter تعيين گرديد. محيط كشت نمك هاي معدني حاوي 2 درصد نفت خام به منظور جداسازي باكتري هاي نفت خوار استفاده شد. سويه نفت خوار با استفاده از روش چاهك گذاري غربال گرديد. نمونه خاك با استفاده از روش سوكسله عصاره گيري و ميزان كربن كل توسط روش كروماتوگرافي گازي مورد سنجش قرار گرفت. به منظور شناسايي سويه باكتريايي برتر از آزمون هاي بيوشيميايي و روش مولكولي PCR استفاده گرديد. يافته ها: در اين مطالعه تعداد 44 سويه باكتريايي جداسازي گرديد. در غربالگري اوليه 20 و در غربالگري ثانويه يك جدايه انتخاب و S31 نام گرفت. جدايه مورد نظر باسيلوس ليكني فورميس گزارش شد. جدايه منتخب نسبت به سويه استاندارد در محيط حاوي 2 درصد نفت خام رشد بهتري داشت. به طوري كه نفت خام را در مدت زمان 30 روز گرماگذاري در دماي تقريبي 30 درجه سليسيوس به ميزان 84 درصد تجزيه نمود. نتيجه گيري: باسيلوس منتخب مي تواند از 2 درصد نفت خام به عنوان منبع كربن و انرژي استفاده نمايد. مطالعه فراتر آن در اجتماع باكتريايي پيشنهاد مي گردد.

Background & Objectives: Bioremediation is the promising technology for the treatment of the contaminated sites since it is costeffective and will lead to complete mineralization. This study was aimed to isolation and phylogenetic identification of indigenous oildegrading bacteria from soil of Karoon area in Ahvaz. Materials & Methods: The crude oil contaminated soil of Karoon area in Ahvaz was sampled accidentally and under sterile condition. The amount of absorbable phosphorus was determined using Olson method and also, carbon, hydrogen and nitrogen by CHN meter device. Mineral salt medium containing 2% crude oil was used for isolation of oil eating bacteria. Following sieving the soil samples, the total carbon content of the soils were analysed by gas chromatography. Biochemical tests and PCR method were used to identify the dominant bacteria. Results: In this study, 44 bacterial strains were isolated, among them 20 isolates in the first and one in the second screening methods were selected, which was nominated as S31.This strain belonged to Bacillus licheniformis. The growth of the selected isolate in the media with 2% crude oil was better than the standard strain and remediated 84% of the crude oil in 30 days incubation time at about 30o C. Conclusion: The selected Bacillus could  use 2% of crude oil as source of carbon and energy and we suggest further studies on this bacterium in bacterial consortia.