جداسازي و شناسايي باكتري كريزئوباكتريوم ايندولوجنس سويه BYK27 مولد پروتئاز از پساب كارخانه شير پگاه كرمان

Isolation and characterization of protease producing Chryseobacterium indologenes strain BYK27 from Kerman,s dairy industry sewage

پروتئازها از جمله مهم‌ترين آنزيم‌هاي صنعتي هستند كه حدود 65 درصد از بازار جهاني آنزيم هاي صنعتي و حدود 25 درصد از توليد كل آنزيم ها را به خود اختصاص داده‌اند. پروتئازها در صنايع مختلف از جمله افزودني‌هاي شوينده‌ها، تيمار فاضلاب، بازيافت نقره و در صنايع غذايي، چرم‌سازي، بازيافت نقره از فيلم‌هاي عكس برداري با اشعه ايكس و داروسازي كاربرد دارند. در اين تحقيق باكتري مولد آنزيم پروتئاز از پساب كارخانه شير پگاه كرمان جداسازي شد. ايجاد هاله در اطراف كلني‌هاي رشد كرده در محيط حاوي اسكيم ميلك آگار) 5 درصد( نشانگر فعاليت پروتئوليتيك مي‌باشد. سويه داراي بالاترين فعاليت پروتئازي از لحاظ بيوشيميايي و مولكولي (توالي‌يابي ژن 16S rRNA) شناسايي شد كهChryseobacterium indologenes مي‌باشد. پروتئاز توليدي توسط اين سويه در سه مرحله رسوب‌گذاري با آمونيوم سولفات، دياليز در بافر تريس 35 ميلي مولار و كروماتوگرافي تعويض يوني Qسفاروز به طور نسبي خالص شد. ميزان فعاليت پروتئازي با استفاده از روش زايموگرافي مورد تاييد قرار گرفت. اين آنزيم داراي بيشترين فعاليت در دماي °C 40، 8 pH و بيشترين پايداري در دماي °C 40‌، 98 pH مي‌باشد. تريتون X100 و شوينده تجاري تاژ باعث افزايش فعاليت و پايداري فعاليت پروتئازي شدند. آنزيم پروتئاز توليد شده در غلظت شوري 1% بيشترين فعاليت پروتئازي را نشان مي‌دهد. اين نتايج خاطرنشان مي‌سازد كه اين آنزيم قابليت استفاده در بيوتكنولوژي از جمله در صنايع شوينده، فرآوري گوشت و سنتز تركيبات با ارزش را دارا مي‌باشد.

Proteases are one of the most important groups of industrial enzymes, constituting 65% of worldwide industrial enzyme marketing and around 25% of the total global enzyme production. Their use encompasses a great number of applications in different industrial sectors, such as detergent additives, in waste treatment processes, silver recovery and the food, leather, photographic and pharmaceutical industries. Protease producing bacteria were isolated from Kerman,s dairy industry sewage with clear zone surrounding colony in Skimmed milk agar plate. Its biochemically tests and 16S rRNA gene sequencing showed that it is Chryseobacterium indologenes strain BYK27. The extracellular protease secreted by this strain partially purified by a combination of ammonium sulfate precipitation, dialysis in TrisHCl buffer 35 mM and ionexchange chromatography. The temperature and pH optima for activity of produced protease were 40˚C, pH 8 and for stability were 40˚C, pH 89. This enzyme was activated by K+, Triton X100 and commercial detergent Tage. It was also active in 1% concentration of salinity. These results showed that protease BYK27 can be used in detergent industry, meat tenderization and peptide synthesis.