بررسي فنوتيپ و ژنوتيپ ژن هاي هموليزين استافيلوكوكوس آرئوس هاي جداشده از ورم پستان تحت باليني در منطقه‌ي ساوجبلاغ، استان البرز

Phenotypic and Genotypic Analysis of Haemolysin Genes of Staphylococcus aureus Isolated from Subclinical Mastitis in Savojbolagh County, Alborz Province

استافیلوكوكوس آرئوس پاتوژن شناخته شده در حیوانات و انسان است كه عفونت‌های مختلفی از جمله ورم پستان را در گاو، گوسفند و بز ایجاد می‌كند و همچنین باعث ایجاد درماتیت، مسمومیت و حتی در برخی موارد عفونت شدیدی مانند توكسیك شوك سندروم (TSS) در انسان می‌شود. این باكتری منجر به خسارت‌های شدید اقتصادی در صنایع لبنیات و همچنین باعث مرگ و میر می‌شود. چون این باكتری می‌تواند مقاوم به آنتی بیوتیك‌های مختلف شود در نتیجه درمان را مشكل می‌كند. مطالعات نشان داده كه بین ورم پستان و فاكتورهای حدت این باكتری ارتباط وجود دارد. یكی از این فاكتورهای حدت آنزیم‌های همولیزین می‌باشد. این بررسی به منظور مطالعه فنوتیپ و ژنوتیپ ژن‌های همولیزین در استافیلوكوكوس آرئوس جدا شده از ورم پستان تحت بالینی در منطقه‌ی ساوجبلاغ (استان البرز) در سطح 540 رأس گاو شیرده انجام شد. ابتدا كارتیه‌های مبتلا به ورم پستان تحت بالینی كه با تست CMT تشخیص داده شده بود در آزمایشگاه كشت داده شد. نمونه‌های استافیلوكوكوس آرئوس با تایید تست كوآگولاز برای تست PCR آماده شد و در نهایت نتایج PCR و محیط كشت‌ها مورد مقایسه و ازریابی قرار گرفت. از 420 كارتیه مبتلا به ورم پستان تحت بالینی 84 (20%) نمونه در كشت مثبت شدند. از این 84 (20%) نمونه 50 (53/59%) نمونه توسط تست كوآگولاز به عنوان استافیلوكوك كوآگولاز مثبت مشخص شدند. 45 (90%) نمونه از 50 نمونه در تست PCR مثبت به عنوان استاف آرئوس معرفی شدند. بر روی این 45 نمونه كشت در بلاد آگار و PCR انجام شد. نتایج حاصله نشان داد كه در برخی نمونه‌ها، ژن های حدت همولیزین براساس كشت باكتری به خوبی بیان می‌شوند كه تقریبا با نتایج حاصل از PCR هم پوشانی دارد، پس می‌توان گفت كه در بیشتر مواقع فنوتیپ و ژنوتیپ ژن‌های حدت باهم رابطه‌ی معناداری را دارند (001/0 =Pvalue)، اما ارتباط مستقیم وجود ندارد زیرا در برخی مواقع ژن‌ها در محیط كشت به خوبی بیان نشده‌اند، بخصوص در ژن همولیزین آلفا این مطلب كاملا محرز می‌باشد.

Staphylococcus aureus pathogens are known in animals and humans. They cause various infections such as mastitis in cattle, sheep and goats, as well as dermatitis, poisoning and even in some cases severe infections such as toxic shock syndrome (TSS) in humans. The bacteria also lead to severe economic losses and mortality in dairy industry, due to the fact that the bacteria can become resistant to antibiotics as a result of treatment makes it difficult. Studies have shown that there is a relationship between mastitis and bacterial virulence factors, one of which is haemolysin enzyme. The aim of this study was to analyze the phenotypes and genotypes of haemolysin genes in Staphylococcus aureus isolated from 540 subclinical bovine mastitis in Savojbolagh county, Alborz province. Subclinical mastitis-affected quarters which has been detected by CMT, were cultured in the laboratory. Staphylococcus aureus samples positive for coagulase test were analyzed by PCR and the results of PCR and culture were compared. Of 420 subclinical bovine mastitis samples, 84(20%) were determined positive by culture. Fifty (59.53%) samples were found positive by coagulase test. Forty five samples (90%) out of this 50 were positive by PCR test. These 45 samples were culture on blood agar and analyzed by PCR . The results showed that in some cases, based on bacterial cultures, haemolysin virulence genes were well expressed and the results almost collapsed with the results of PCR. Hence, we can say that in most cases, there is a significant relationship (P value = 0/001) between the phenotypes and genotypes of virulence genes. However, there is no direct relation, because in some cases, genes are not expressed in culture as well and this is quite obvious in alpha haemolysin gene.