ارزيابي تاثير محافظتي اتيل پيروات بر پارامترهاي اسپرم و روند رشد جنين هاي حاصل از لقاح آزمايشگاهي (IVF) در موش هاي سوري تحت درمان با فنيل هيدرازين

Assessment of protective effect of ethyl pyruvate on sperm parameters, and trend of embryological development after in vitro fertilization (IVF) in phenylhydrazine treated mice

چكيده زمينه و هدف: استرس اكسيداتيو مي تواند از دلايل تغيير در پارامتر اسپرم وتوقف رشد جنين از رحم باشد كه منجر به از بين رفتن در اثر نكروز يا مرگ برنامه ريزي شده مي شود. هدف از اين مطالعه بررسي اثرات محافظتي اتيل پيرواتEthylpyruvate (EP) بر پارامتر هاي اسپرم و روند لقاح داخل آزمايشگاهي در شرايط تنش اكسيداتيو حاصل از كمخوني هموليتيك القا شده توسط فنيل هيدرازين Phenylhydrazine (PHZ) مي باشد. روش بررسي: دراين مطالعه تجربي تعداد 40 قطعه موش سوري نر بطور تصادفي به چهار گروه تقسيم گرديدند.گروه كنترل سرم فيزيولوژي(ml,IP1/0) دريافت نمود.گروه PHZ، PHZ با دوز mg/100gr/b.w8 براي بار اول و دوز mg/100gr/b.w6 هر 48 ساعت يك بار،درگروه PHZ+EP، اتيل پيروات با دوزmg/kg,IP40 و فنيل هيدرازين با دوز مشابه گروه PHZ تزريق شد و درگروه چهارم فقط اتيل پيروات با دوز مشابه گروه PHZ+EP تجويز شد. جهت انجام لقاح داخل آزمايشگاهيIn Vitro Fertilization (IVF) 40 قطعه موش سوري ماده براي استحصال تخمك استفاده گرديد. 35 روز پس از شروع دوره درمان موشهاي نرآسان كشي شده و اسپرم آنها استحصال و پارامترهاي اسپرم بررسي گرديد و براي هرگروه درماني نر يك گروه ماده به همان تعداد در نظر گرفته شد. براي گرفتن تخمك از آنها، تحريك تخمك گذاري با استفاده PMSG و HCGانجام شد، حيوانات پس از بيهوشي آسان كشي شدند و پس ازاستحصال تخمك و انجام لقاح با اسپرم در محيط كشت HTFM+4mgBSA نگهداري شدند، تخمك هاي لقاح يافته به مدت 120 ساعت انكوبه شدند و مراحل رشد جنيني در اين مدت مورد بررسي قرار گرفت ، آناليز آماري داده ها توسط نرم افزار نرم افزارSPSS ويرايش 16و پس از كنترل نرماليتي توزيع داده ها با آزمون آناليز واريانس يكطرفه مورد تجزيه تحليل قرار گرفت و براي مقايسه درصد باروري از نرم افزار minitab و روش 2proportionاستفاده شد. نتايج: ميانگين درصد اسپرمهاي با DNA آسيب ديده، اسپرم با عدم بلوغ هسته اي، اسپرم با مورفولوژي غير طبيعي درگروه PHZ نسبت به گروه كنترل كاهش معني داري پيدا نمود، كه با تجويز آنتي اكسيدانت اين شاخص ها به طور معني داري بهبودپيدا نمودند (05/0 > P). در گروه PHZ، ميانگين درصد لقاح، بلاستوسيت، و تعداد جنين هاي متوقف شده نسبت به گروه كنترل كاهش قابل ملاحظه اي نشان داده، كه با تجويز اتيل پيروات اين پارامترها به طور قابل ملاحظه اي بهبود پيدا نمودند(05/0 > P). نتيجه گيري: اين مطالعه نشان دادكه استفاده از اتيل پيروات باعث بهبودي شاخصهاي اسپرم و روند رشد جنين در شرايط آزمايشگاهي شده لذا براي بهبودي پارامترهاي هاي فوق استفاده از اتيل پيروات توصيه مي شود. واژگان كليدي: اتيل پيروات، فنيل هيدرازين، كيفيت اسپرم، لقاح داخل آزمايشگاهي، موش سوري

ABSTRACT Background and Aim: Oxidative stress can lead to change in the sperm parameters and cessation of embryological development This study aimed to assess the protective effect of ethylpyruvate (EP) on sperm parameters and trend of in vitro fertilization under oxidative stress conditions produced by phenyl hydrazine (PHZ) induced hemolytic anemia in mice. Material and Method: 40 NMRI mice with the age range of 8-10 weeks and mean weight of 26±2gr, were randomly divided into four equally groups. The control group received normal saline (0. 1 ml/day, IP). Group2 (PHZ group) was treated with initial dose of PHZ (8mg/100gr/b. w, IP) followed by 6mg/100gr/b. w, IP, every 48hr. Group3, (Group PHZ+EP) received the same dose of PHZ and EP (40mg/kg/daily/IP). Ethyl pyruvate group received only EP (40mg/kg/daily, IP). Treatment period took 35 days. Then, after euthanasia the sperm were collected from caudal region of epididymis and examined for sperm count, sperm viability, motility and morphology. Testis tissue MDA and serum testosterone levels of all experimental groups were also evaluated. Result: In this study, in PHZ group we found a considerable reduction in the mean percentage of the number of the sperms with damaged DNA and abnormal morphology compared to the control group. After administration of antioxidant these parameters improved significantly (p < 0.05). In PHZ group we found significant decrease in the percentage of fertility, blastocysts, and the number of arrested embryos in comparison to the control group, which after administration of ethylpyruvate these parameters improved significantly. Conclusion: Treatment of the mice with PHZ led to improvement of the sperm parameters and trend of embryological development. Key words: Ethyl pyruvate, Phenylhydrazine, Sperm parameters, Stress oxidative, Mice.