بررسي اثر مهاركننده‌ي كربونيل سيانيد 3-كلروفنيل هيدرازون و تعيين ميزان بيان پمپ ترشحي MexCD-oprJبر روي ايزوله‌هاي سودوموناس آئروژينوزا جدا شده از بيماران بستري در بيمارستان شهيد مطهري شهر تهران

Evaluation of Carbonyl cyanide 3chlorophenyl hydrazone Effect and Efflux Pump Expression Level of mexCDoprJ among Pseudomonas aeruginosa Strains Isolated from Hospitalized Patients in Shahid Motahari Hospital in Tehran during 20142015

زمينه و هدف: فعاليت پمپ هاي ترشحي از مهم ترين مكانيسم هاي مقاومت در سودوموناس آئروژينوزا مي باشد كه مانع تجمع دارو درون باكتري مي گردد. لذا هدف از اين مطالعه، بررسي اثر مهاركننده ي كربونيل سيانيد 3كلروفنيل هيدرازون (CCCP) و تعيين ميزان بيان پمپ ترشحي MexCDoprJ در سويه هاي سودوموناس آئروژينوزا جدا شده از بيماران بستري در بيمارستان شهيد مطهري شهر تهران در سال هاي 93 تا 94 بود. روش بررسي: اين مطالعه ي توصيفي بر روي 100 ايزوله ي سودوموناس آئروژينوزا از بيماران دچار سوختگي بستري در بيمارستان شهيد مطهري انجام گرفت. تست هاي آنتي بيوگرام با استفاده از روش هاي ديسك ديفيوژن و ميكرودايلوشن براث براساس رهنمودهاي CLSI و بررسي اثر مهاركننده كربونيل سيانيد 3كلروفنيل هيدرازون (CCCP) به روش ميكرودايلوشن براث انجام گرديد. ميزان بيان پمپ ترشحي MexCDoprJ با تكنيك RealTime PCR تعيين شد و درنهايت جهش هاي ژن nfxB با روش هاي PCR و Sequencing تعيين گرديد. يافته ها: از مجموع 100 ايزوله ي سودوموناس آئروژينوزا، بيشترين حساسيت و مقاومت به ترتيب نسبت به كليستين (100 درصد) و تيكارسيلين (98 درصد) گزارش شد و در 16 ايزوله، اثر مهاري كربونيل سيانيد 3كلروفنيل هيدرازون ديده شد. نتايج Realtime PCR براي اين ايزوله ها، افزايش بيان محدوده ي 34/1526/0 برابري (ميانگين 1/4 برابر) را مشخص كرد و تعيين سكانس توالي nfxB، تغيير لوسين به پرولين را در موقعيت 14 نشان داد. نتيجه گيري: افزايش بيان پمپ ترشحي MexCDoprJ در اين مطالعه گواهي بر گسترش موتانت هاي nfxB در عفونت هاي سوختگي مي باشد، بنابراين مهاركننده ي كربونيل سيانيد 3كلروفنيل هيدرازون جهت تداخل در عملكرد اين پمپ ها مي تواند مفيد باشد.

Background and Objective: Efflux pumps are one of the major resistance mechanisms in Pseudomonas aeruginosa that inhibit the accumulation of antibiotics in bacterial cells. The aim of this study was determining the effect of carbonyl cyanide 3chlorophenyl hydrazone (CCCP) and detecting the overexpression of pump MexCDoprJ in P. aeruginosa isolated from burn patients in Shahid Motahari hospital during 2014 and 2015. Materials and Methods: This descriptive study was performed on 100 P. aeruginosa isolates from burn patients in Shahid Motahari hospital. Antibiotic susceptibility tests were performed by KirbyBauer disc diffusion and broth microdilution methods according to the CLSI guidelines. The effect of CCCP was determined using the broth microdilution method. The expression levels of MexDoprJ (an efflux pump) was evaluated by RealTime PCR and finally detection of nfxB mutations was carried out by PCR and sequencing techniques.; Results: Antibiogram for 100 P. aeruginosa showed maximum susceptibility and resistance to colistin (100%) and ticarcilin (98%), respectively. The inhibitory effect of CCCP was apparently seen in 16 isolates. Realtime PCR results for these strains showed overexpression in range of 0.2615.34 (mean: 4/1). The PCR and sequencing techniques showed mutations that converts lucin to prolin in position 14 of the protein sequence. Conclusion: The increase in expression level of efflux pump MexCDoprJ shows the prevalence of nfxB mutants in burn wound infections. Therefore, use of carbonyl cyanide 3chlorophenyl hydrazone (CCCP) can help disrupt the function of efflux pumps and improve the effects of antibiotics.