تعيين ويژگي‌هاي بيولوژيكي و مولكولي فيتوپلاسماي همراه با بيماري غنچه درشت گوجه فرنگي در استان زنجان

Biological and molecular characterization of the phytoplasma associated with tomato big bud disease in Zanjan province, Iran

غنچه درشت يكي از بيماري هاي مهم و اقتصادي گوجه فرنگي (Lycopersicon esculentum Mill.) در نقاط مختلف جهان است. در بازديد هاي سال 1392 از مناطق گوجه فرنگي كاري زنجان، علائم بيماري غنچه درشت مشاهده گرديد. عامل بيماري به وسيله پيوند از گوجه فرنگي داراي علائم به گوجه فرنگي و بادنجان و به وسيله سس از گوحه فرنگي به پروانش انتقال داده شد. در گياهان مايه زني شده با پيوند و سس علائم بيماري هاي فيتوپلاسمايي ظاهر شد. در آزمون هاي پي سي آر يك مرحله اي با استفاده از جفت آغازگر P1/P7و دومرحله اي با استفاده از جفت آغازگرهاي P1/P7 و R16F2n/R16R2 ، در نمونه هاي دي ان اي استخراج شده از گوجه فرنگي داراي علائم در طبيعت و گياهان مايه زني شده باپيوند وسس قطعه هاي مورد انتظار، به ترتيب 1800 و 1250 جفت باز از اپرون ار ان اي ريبوزومي تكثير شد. چند شكلي طولي قطعات برشي مجازي (Virtual-RFLP) ناحيه تكثير شده با جفت آغازگرR16F2n/R16R2 نشان داد كه فيتوپلاسماي همراه با غنچه درشت گوجه فرنگي در زنجان متعلق به زير گروه A در گروه ار ان اي ريبوزومي اف‍ژولش شبدر ((16SrVI مي باشد.در آناليز فيلوژنتيكي با استفاده از ترادف كامل ژن ار ان اي ريبوزومي 16S تعلق فيتوپلاسماي عامل غنچه درشت گوجه فرنگي در زنجان به16SrVI-A تاييد شد. اين اولين گزارش از وجود بيماري غنچه درشت گوجه فرنگي و تعيين ويزگي هاي بيولوژيكي و مولكولي فيتوپلاسماي همراه با آن در استان زنجان مي باشد.

Tomato big bud (TBB) is an economically important disease of tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) in various regions of the world. In 2013 surveys of Zanjan province (Iran) tomato fields, symptoms of TBB disease were observed. The disease agent was successfully transmitted by grafting from a naturally symptomatic tomato in Zanjan to tomato and eggplant and from tomato to periwinkle via dodder (Cuscuta campestris Yank.) transmission. In inoculated plants phytoplasma-type symptoms were produced. Expected length DNA fragments of nearly 1,800 and 1,250 bp were respectively amplified from naturally infected tomato and experimentally inoculated plants in direct polymerase chain reaction (PCR) using phytoplasma primer pair P1/P7 or nested PCR using the same primer pair followed by R16F2n/R16R2 primers. Virtual restriction fragment length polymorphism (RFLP) of nested PCR products (1.2 kbp) showed that Zanjan TBB (ZTBB) phytoplasma is related to subgroup A in 16SrVI (clover proliferation) phytoplasma group. Phylogenetic analysis of full length 16S rDNA classified ZTBB with 16SrVI-A subgroup. This is the first report of biological and molecular characterization of a phytoplasma associated with TBB disease in Zanjan province.