شناسايي مولكولي فاكتورهاي حدت اشريشيا كلي در سه سويه ETEC ،EHEC و EPEC در گوساله ها و بره هاي مبتلا به اسهال در شيراز

Molecular Identification of Virulence Factors of E. coli in Three Strains of ETEC, EHEC and EPEC in Calves and Lambs with Diarrhea in Shiraz

اسهال ناشي از سويه هاي پاتوژن اشريشياكلي (ETEC،EHEC و EPEC) در گوساله ها و بره ها به ويژه در نخستين روزهاي پس از تولد، به علت تلفات و خسارات اقتصادي حاصله از اهميت زيادي برخوردار است. در طي اين تحقيق 200 سوآب ركتوم از گوساله ها و بره هاي يك تا 30 روزه مبتلا به اسهال در مدت يك سال (1392تا 1393) در شهرستان شيراز جمع آوري شد. نمونه ها بر روي محيط هاي مك كانكي آگار و ائوزين-متيلن بلو و مينكا كشت داد شد. در اين مطالعه شيوع ژن هاي بيماري زاي اشريشياكلي انتروتوكسيژنيك (F41 ،K99، وSTa) اشريشيا كلي انتروهموراژيك (Stx1، Stx2 و eae) و اشريشيا كلي انتروپاتوژنيك (eae و bfpb) با استفاده از تكنيك Multiplex PCR بررسي شد. نتايج نشان داد از 133 اشريشياكلي جداشده 03/12 درصد داراي هرسه ژن بيماري زاي ETEC و سه درصد داراي هر سه ژن بيماري زاي EHEC مي باشند. همچنين تعيين توالي ژن حدت K99 نشان داد كه توالي نوكلئوتيدي آن ها، 97 تا 100 درصد با توالي هاي نوكلئوتيدي رفرنس هاي موجود در بانك ژني شباهت دارد. پراكندگي شيوع عفونت با سه سويه مذكور در مناطق مختلف جهان متفاوت مي باشد. اين تفاوت ها مي تواند ناشي از عوامل مديريتي، سن گوساله ها، زمان دريافت آغوز، حجم و كيفيت آن و واكسيناسيون مادران باردار باشد.

Pathogenic E.coli (ETEC, EHEC and EPEC) cause diarrhea in new born calves and lambs are important especially due to mortality rate and high economic losses. In this study 200 rectal swab samples were collected from 1-30 day-old calves and lambs with diarrhea during 2013-2014 in Shiraz. The samples were inoculated on Mac Conkey, EMB and Minca agar media. The presence of various virulence genes of ETEC (k99, F41 fimbria and Sta), EHEC (Stx1, Stx2 and eae) and EPEC (bfpb and eae) was investigated using multiplex PCR. The PCR test results showed that out of 133 E. coli isolates, 12.03% and 3% possessed all three virulence genes of ETEC and EHEC, respectively. The sequencing of K99 gene showed 97-100% homology between the isolates. The variety of ETEC, EPEC and EHEC prevalence has been reported in the world. These variations could be due to managing factors, calves age, colostrum intake and dam vaccination.