بررسي كمي و كيفي آفلاتوكسين هاي B1, B2, G1 and G2 در دو گونه قارچ آسپرژيلوس با روش HPLC

Study of Quantitative and Qualitative of B1, B2, G1 and G2 Aflatoxins in Two Species of Aspergillus With HPLC Method

آفلاتوكسين‌ها توسط گونه­ هاي خاصي از قارچ­ هاي جنس Aspergillus توليد مي ­شوند و در محصولات غذايي خطر هميشگي براي انسان و حيوان در نظر گرفته مي ­شوند. در اين پژوهش ميزان توليد آفلاتوكسين ­هاي B1, B2, G1 and G2 در گونه‌هاي Aspergillus flavus و Aspergillus foetidus با روش HPLC بررسي شده است. قارچ ­هاي ياد شده پس از جداسازي و خالص ­سازي، مورد شناسايي قرار گرفته و در 50 ميلي­ليتر محيط مايع PDB كشت، سپس در شرايط بهينه ­ي رشد، نگهداري و آفلاتوكسين­ هاي حاصل از آن­ها استخراج گرديدند. مقدار 25 ميلي­ليتر از محيط حاوي آفلاتوكسين از فيلتر عبور داده شد و 10 ميلي­ ليتر كلروفرم به آن اضافه گرديد. فاز پاييني مخلوط حاصل در محيط خلاء حلال پراني شد. باقيمانده در سه ميلي­ ليتر متانول حل و فيلتر شد. در مرحله­ ي بعد مقدار 20 ميكروليتر از محيط حاوي آفلاتوكسين به دستگاه HPLC تزريق و كروماتوگرام آن به دست آمد. بر اساس تحليل داده ­ها، در گونه­ ي A. foetidus آفلاتوكسين­ هاي B1، B2 وG1 به ترتيب به ميزان 8/71، 2/3 و 1/3 ميلي­ گرم در روز 24، و آفلاتوكسين G2 به ميزان 0/02 ميلي­گرم روز 20 پس از كشت در 50 ميلي­ ليتر محيط PDB به بيشترين مقدار خود رسيدند. در گونه A. flavus آفلاتوكسين­ هاي B2 ,B1 و G2 به ترتيب به ميزان 487/92، 18/46 و8/57 ميلي­گرم در روز 20، و آفلاتوكسين G1 به ميزان 126/49 ميلي­گرم در روز 24 پس از كشت در 50 ميلي ­ليتر محيط PDB به بيشترين مقدار خود رسيدند. بيشترين توكسين توليد شده (487/49 ميلي­ گرم) از نوع B1 در قارچ A. flavus و كمترين آن (0/02 ميلي­گرم) از نوع G2 در قارچ A. foetidus بوده ­است.

Aflatoxins are the fungal toxins produced by Aspergillus spp. These fungal metabolites in food and oil seed have a big lifetime risk for acute and chronic disease in human and animals. In this survey for production levels of B1, B2, G1 and G2 aflatoxins in two species of Aspergillus was namely A. Alaus and A. Foctides has been investigated. These fungi were grown in Potato Dextrose Broth (PDB) medium and aflatoxins were determined using HPLC method. These species were cultured in 50 ml flask at 26ºc, with 80% humidity and dark place for 32 days. 25 ml of broth cultures were filtered and then extracted with 10 ml chloroform and evaporated the organic solvent and bring the organic solvent in 3ml methanol. After filtration, 20 μl of final solvent was injected to HPLC instrument. The result has shown that A. foetidus produced the maximum amount of B1, B2 and G1 with 8.71, 2.3 & 3.1 mg after 24 days post-inoculation and the maximum amount of G2 with 0.02 after 20 days post-inoculation per 50 ml of PDB. A. flavus produced the maximum amount of B1, B2 and G2 with 487.92, 18.46 & 8.57 mg after 20 days post-inoculation and the maximum amount of G1 with 126.49 mg after 24 days post-inoculation per 50 ml of PDB. Overall the B1 is maximum afltoxin in A. flavus and G2 is the minimum aflatoxin in A. foetidus.