تاثير افزودن مقادير مختلف بوتيليتد هيدروكسي تولوئن بعنوان آنتي اكسيدان سنتتيك بر فرآيند انجماد - يخ گشايي مني قوچ

Effect of adding Butylated hydroxytoluene as a synthetic antioxidant on freezing/thawing process of ram semen

زمينه مطالعاتي: يكي از دلايل كاهش باروري اسپرم، توليد مقادير زياد راديكال آزاد طي فرآيندهاي انجماد، نگهداري و يخ گشايي است. راديكال هاي آزاد منجر به تغييرات فراساختاري و بيوشيميايي غشاء اسپرم وكاهش ميزان زنده ماني آنها پس از يخ گشايي مي شوند. بوتيليد هيدروكسي تولوئن (BHT) يك آنالوگ سنتتيك ويتامين E است كه با تبديل كردن راديكال هاي پروكسي به هيدروپروكسايد، باعث كنترل اتواكسيداسيون مي شود. هدف: هدف اين تحقيق بررسي اثرات استفاده از سطوح مختلف BHT به منظور بهبود كيفيت مني قوچ در فرآيند انجماد- يخ گشايي بود. روش كار: از پنج قوچ، دوبار در هفته اسپرم گيري شد. سطوح مختلف BHT (1، 5/1، 2 و 3 ميلي مولار) به رقيق كننده بر پايه تريس افزوده شد. بعد از يخ گشايي نمونه هاي مني، فراسنجه هاي حركتي، زنده ماني، يكپارچگي غشاء، شمار اسپرم هاي غير طبيعي و مقدار ليپيد پراكسيداسيون (MDA) ارزيابي شدند. نتايج: افزودن سطوح 5/1 و 2 ميلي مولار BHT باعث افزايش درصد زنده ماني، يكپارچگي غشاي پلاسمايي و تحرك كل اسپرم ها و كاهش درصد اسپرم هاي غيرطبيعي نسبت به گروه كنترل شد (05/0P<). افزودن 5/1 و 2 ميلي مولار از BHT باعث كاهش معني دار ميزان MDA شد (05/0P<). افزودن سطوح مختلف BHT باعث كاهش معني دار حركت پيش رونده اسپرم ها نسبت به گروه شاهد شد (05/0P<). تيمارهاي 1 و 2 ميلي مولار باعث كاهش معني داري سرعت حركت اسپرم ها در مسير مستقيم شدند (05/0P<). افزودن سطوح مختلف BHT تاثير معني داري در فراسنجه هاي تناوب عرضي زنش، خطي بودن حركت و سرعت در مسير منحني نسبت به گروه شاهد ايجاد نكرد. تيمارهاي 5/1 و 3 ميلي مولار راستي مسير طي شده اسپرم ها را نسبت به گروه شاهد بطور معني داري افزايش دادند. نتيجه گيري: داده هاي حاصل از آناليز آماري نشان داد كه افزودن BHT به رقيق كننده مني باعث بهبود اكثر پارامترهاي اسپرم ها، بعد از يخ گشايي مي شود.

BACKGROUND: One of the reasons for reduction of fertility in sperm is extra production of free radicals during various stages including cryopreservation, storage and freeze-thawing process of sperm. Free radicals lead to changes in biochemical and ultrastructure of the sperm membrane, decreasing survival rate after thawing of sperm. Butylated hydroxytoluene (BHT) is a synthetic analogue of vitamin E that controls the auto-oxidation reaction by converting peroxy radicals to hydroperoxides. OBGECTIVES: The purpose of this study was to investigate the effects of different levels of Butylated hydroxytoluen (BHT) to improve the quality of ram semen in the process of freezing/thawing. METHODS: In this study, five rams were used for semen collection twice a week. Different levels of BHT (1, 1.5, 2, 3 mM) were added to tris-yolk based diluents. After freezing-thawing of semen samples, the dynamic parameters, viability, membrane integrity‚ sperm abnormality and lipid peroxidation (MDA) were evaluated. RESULTS: the addition of 1.5, 2 mM BHT significantly improved total and progressive motility, viability and plasma membrane integrity and decreased the sperm abnormality percentage compared with the control group (P< 0.05). Addition of 1.5 and 2 mM BHT was significantly reduced MDA concentration (P < 0.05). Treatments 1 and 2 mM significantly decreased sperm straight line velocity. Treatments 1 mM showed significant differences with the control group regarding beat cross frequency of sperm. Treatments 1.5, 2 and 3 mM were significantly increased sperm curvilinear velocity. CONCLUSIONS: Statistical analysis of data showed that the addition of BHT to semen diluent improves the majority of sperm parameters after thawing