شناسايي مولكولي و ژنوتايپينگ سويه هاي اكينوكوكوس گرانولوزوس جدا شده از شتر و سگ در منطقه اصفهان طي سال هاي 95-1394

(Molecular and genotyping identification of Echinococcus granulosus from camel and dog isolates in Isfahan, Iran (2015-2016

سابقه و هدف: هيداتيدوز يكي از مهم­ترين بيماري­ هاي انگلي زئونوز در سطح جهان است و عامل آن اكينوكوكوس گرانولوزوس مي ­باشد. باتوجه به اهميت شناسايي ژنوتايپ­ هاي انگل در كنترل بيماري، اين مطالعه با هدف سنجش تنوع ژنتيكي ايزوله ­هاي شتر و سگ در منطقه اصفهان صورت گرفت. مواد و روش­ ها: اين مطالعه با طراحي مقطعي طي سال­ هاي 95-1394 روي 51 كبد و ريه شتر آلوده به كيست هيداتيد جمع ­آوري شده از كشتارگاه ­هاي صنعتي زرين­ شهر و نجف­ آباد و 200 كرم بالغ جمع­ آوري شده از سگ­ هاي ولگرد مناطق مختلف جغرافيايي اصفهان جهت شناسايي ژن­ هاي ميتوكندريايي CO1 و ND1 صورت گرفت. DNA پروتواسكولكس و كرم بالغ استخراج شده و با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي، واكنش PCR و تعيين توالي صورت گرفت. به ­منظور تعيين ميزان مشابهت ژنتيكي بين توالي ­ها و هم­ چنين موارد ثبت شده در بانك ژن، آناليز دوبه ­دو با نرم ­افزار ClustalW2 صورت گرفت. نتايج: روش ­هاي PCRو تعيين توالي ژن ­هاي CO1 و ND1 در سگ و شتر، وجود ژنوتايپ گوسفندي (G1)، گاوي (G3) و شتري (G6) اكينوكوكوس گرانولوزوس را در منطقه اصفهان نشان داد. ژنوتايپ غالب در هر دو ميزبان، سويه شايع گوسفندي (G1) ­بود. ميزان مشابهت ژنتيكي دو ژن ND1 و CO1 بين ايزوله­ هاي شتر و موارد ثبت شده در بانك ژن ۳۰/۲۵ تا 100 درصد و براي ايزوله­ هاي سگ ۲۷/۴۷ تا 100 درصد تعيين شد. نتيجه­ گيري: ژن­ هاي ميتوكندرياييND1 وCO1 ماركرهاي مولكولي مناسبي براي تعيين تغييرات ژنتيكي ايزوله­ هاي شتر و سگ اكينو­كوكوس گرانولوزوس مي­ باشد. سويه غالب اين كرم در منطقه اصفهان همانند ساير نقاط كشور، ژنوتيپ G1 (استرين شايع گوسفندي) متعلق به كمپلكس G1-G3 اكينوكوكوس گرانولوزوس مي­ باشد.

Background: Hydatidosis is one of the most important zoonotic parasitic disease worldwide caused by Echinococcus granulosus. Given the importance of parasite genotyping in disease control, this study was aimed to evaluate the genetic variation of the camel and dog isolates in Isfahan. Material and Methods: This cross-sectional study was done on infected livers and lungs of camels with hydatid cyst (n=51) during 2015-2016, collected from Zarinshahr and Najafabad industrial abattoir and 200 adult E. granulosus worms collected from stray dogs in different geographical regions of Isfahan for the molecular identification of mitochondrial genes (CO1, ND1). The DNA of protoscolices and adult worms were extracted, the PCR and sequencing were done using specific primers. Pairwise sequence alignment was used to identify the genetic similarity between the sequences and the registered ones in Gen bank using Clustalw2 software. Results: The PCR and sequencing of CO1 and ND1 genes on dog and camel samples showed different E. granulosus genotypes, including the common sheep strain (G1), bovid strain(G3) and camel strain (G6) in Isfahan region. The most frequent strains were the common sheep strain (G1). The genetic similarity between both ND1 and CO1 isolates taken from camel, dog and the isolates registered in Gene bank were 30.25-100% and 27.47-100% for camel and dog, respectively. Conclusion: Mitochondrial ND1 and CO1 genes are proper molecular markers for identifying the genetic variation of the camel and dog E. granulosus. The dominant strain of the worm in Isfahan, is the same as the other parts of the country, i.e., the G1 genotype (the most common sheep strain) belonged to the G1- G1 E. granulosus complex.