كلون‌سازي و بررسي بيان ژن ureG به عنوان كانديداي واكسن ژني عليه هليكوباكتر‌‌پيلوري

مقدمه: هليكوباكتر پيلوري، نوعي باكتري گرم منفي است كه جمعيت زيادي از جوامع انساني را در سراسر جهان دچار كرده است. اوره‌آز هليكوباكتر‌پيلوري براي بقاي آن در معده‌ي انسان ضروري است و ژن ureG يكي از مهم‌ترين عوامل مهم بيماريزايي آن است. هدف: كلون‌سازي ژن ureG براي ايجاد واكسن ژني عليه هليكوباكتر‌پيلوري مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، نخست از هليكوباكتر‌پيلوري DNA استخراج شد. تكثير ژن ureG با استفاده از پرايمرهاي ويژه اين ژن انجام و فراورده PCR به روش كلون‌سازي T/A در وكتور pTZ وارد شد. سپس، ژن ureG از درون وكتور pTZ با آنزيم‌هاي‌XbaI و SalI برش داده شد و در وكتور بياني pCI-neo، ساب‌كلون شد. وكتور نوتركيب pCI-neo-ureG را به روش الكتروپوريشن وارد سلول CHO كرده و بيان ژن ureG بر ژل SDS-PAGE مشاهده شد. نتايج: تكثير و جداسازي ژن ureG هليكوباكتر‌پيلوري به روش PCR با موفقيت انجام شد. نتايج نشان داد ژن ureG به ترتيب در وكتورهاي pTZ و pCI-neo به درستي كلون شده و سازواره فرجامين(نهايي) pCI-neo-ureG توليد شده‌است. نتيجه وارد سازي سازواره نهايي در سلول CHO نيز نشان دهنده بيان و ايجاد يك باند 23 كيلودالتوني روي ژل SDS-PAGE بوده است. نتيجه‌گيري: ژن ureG كلون‌سازي شده در وكتور بياني pCI-neo توانايي بيان و توليد فرآورده پروتييني اختصاصي اين ژن در سلول جانوري CHO را دارد. بنابراين، اين سازواره ژني را مي‌توان به عنوان كانديداي مناسبي براي بررسي‌هاي بعدي در مورد واكسن‌هاي نوتركيب عليه هليكوباكتر‌پيلوري در الگوي حيواني شناساند.

Introduction: Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium that has infected many human societies worldwide. the urease of H. pylori is essential for its survival in the human stomach and the ureG gene is one of the most important virulence factors. Objective: The aim of this study is the cloning of the ureG gene in order to generate a gene vaccine against H. pylori. Materials and Methods: In this experimental study, the DNA was extracted from helicobacter pylori. amplification of ureG gene was performed using specific primers and the PCR products were cloned into pTZ vector using T/A cloning technique. the ureG gene was then cut from the pTZ vector using the XbaI and SalI enzymes and the gene was subcloned in the pCI-neo expression vector. the pCI-neo-ureG recombinant vector was transformed into CHO cells by electroporation, and ureG gene expression was detected on a SDS-PAGE gel. Results: The H. pylori ureG gene was amplified and isolated by PCR successfully. the results showed that the ureG gene was cloned into pTZ and pCI-neo vectors, correctly and the pCI-neo-ureG final construct was generated. the results of insertion of final construct into CHO cells showed the 23 KDa product on SDS-PAGE gel. Conclusion: The ureG gene cloned into pCI-neo expression vector has the potency of expression and production of the specific product of this gene in CHO animal cell. therefore, this gene construct can be used as a suitable candidate for the further experiments of recombinant vaccines against H. pylori in animal models. Conflict of interest: none Declared