ژنوتايپينگ و بررسي حساسيت آنتي بيوتيكي ايزوله هاي بيمارستاني سودوموناس ائروجينوزا در بخش سوانح سوختگي مركز آموزشي و درماني سيناي تبريز

Genotyping and Antibiotic Susceptibility Patterns of Pseudomonas aeruginosa Isolated from Burn Ward of Sina Hospital in Tabriz

زمينه و اهداف: سودوموناس ائروجينوزا يكي از باكتري هاي مهم در عفونت هاي بيمارستاني است كه قادر به ايجاد مقاومت هاي دارويي در مقابل بسياري از عوامل ضدميكروبي و آنتي بيوتيك ها مي باشد. اين باكتري فرصت طلب در بيماران مختلف بويژه در بيماران مبتلا به نقص ايمني از قبيل بيماران بستري در بخش هاي مراقبت ويژه و بخش هاي سوختگي قادر به ايجاد عفونت هاي خطرناك و منجر به مرگ مي گردد. اين باكتري اغلب از منشاء محيط بيمارستان انتقال يافته و با داشتن مقاومت آنتي بيوتيكي وسيع چرخه ي عفونت هاي بيمارستاني را دوام مي بخشد. اين مطالعه جهت شناخت بهتر اپيدميولوژيك سويه هاي دخيل در عفونت هاي سوختگي در بخش سوانح سوختگي مركز آموزشي و درماني سيناي تبريز و مقايسه ي ژنومي باكتري هاي جدا شده از عفونت هاي سوختگي با استفاده از روش RAPD (Random amplified polymorphic DNA) انجام شد. مواد و روش ها: تعداد 124 ايزوله ي سودوموناس ائروجينوزا از نمونه هاي مختلف بيماران بستري در بخش سوختگي شامل ترشحات زخم سوختگي و خون، با روش هاي مرسوم آزمايشگاهي شامل ميكروسكوپي، كشت و انجام تست هاي بيوشيميايي جداسازي شدند. ايزوله هاي جمع آوري شده جهت (1) شناسايي الگوي حساسيت و مقاومت در برابر آنتي بيوتيك هاي رايج در درمان شامل سفتازيديم، آزترونام، كاربني سيلين، پلي ميكسين B، كوليستين، جنتامايسين و سيپروفلوكساسين با استفاده از روش ديسك آگار ديفيوژن و (2) DNA ايزوله ها استخراج شده و از روش RAPD-PCR با استفاده از دو پرايمر كوتاه 272(5’-AGCGGCCAA-3’) و 208(5’-ACGGCCGACC-3’) مورد مقايسه قرار گرفتند. يافته ها: حساسيت و مقاومت به آنتي بيوتيك هاي آزمايشي، نشانگر مقاومت بالا در برابر آزترونام (1/70٪)، سفتازيديم (1/66٪)، كوليستين (2/61٪)، كاربني سيلين (6/51٪)، جنتامايسين (5/47٪)، سيپروفلوكساسين (5/18٪) و پلي ميكسينB (7/13٪) بود. ايزوله هاي آزمايشي 41 الگوي حساسيت آنتي بيوتيكي نشان دادند. نتايج RAPD نشانگر وجود 32 ژنوتيپ مختلف در بين ايزوله هاي آزمايشي بود كه از اين تعداد 60 ايزوله داراي ژنوتيپ مشابه (42 ايزوله با يك باند مشابه، 2 ايزوله با دو باند مشابه، 8 ايزوله با سه باند مشابه، 6 ايزوله با چهار باند مشابه و 2 ايزوله با هشت باند مشابه) بودند. اگرچه مقايسه ي ژنوتيپ RAPD با الگوي حساسيت آنتي بيوتيكي در يكي از ژنوتيپ ها تشابهات الگوي حساسيت آنتي بيوتيكي را نشان داد، ولي در بقيه ي ژنوتيپ ها چنين تشابهي مشاهده نشد. نتيجه گيري: در اين مطالعه 124 ايزوله ي سودوموناس ائروجينوزاي ايزوله شده از عفونت هاي سوختگي بيشترين مقاومت را به آزترونام (1/70٪) و كمترين ميزان مقاومت را به پلي ميكسين B (7/13٪) نشان دادند. ايزوله هاي آزمايشي داراي 41 الگوي حساسيت آنتي بيوتيكي متفاوت بودند.نتايج RAPD-PCR نشانگر وجود 32 ژنوتيپ مختلف در باكتري هاي آزمايشي بود. مقايسه ي الگوي حساسيت آنتي بيوتيكي ايزوله ها بر اساس ژنوتيپ RAPD باكتريها فقط در ژنوتيپ 3 كه شامل 42 ايزوله (8/33٪) بود تشابه الگوي حساسيت آنتي بيوتيكي را نشان داد، درحاليكه در بقيه ي ژنوتيپ ها هيچگونه تشابهي بدست نيامد. لذا اين تشابهات احتمال در گردش بودن اين سويه ها در بين بيماران بخش سوختگي را مطرح مي سازد و نياز به اعمال شرايط دقيق ضد عفوني و پايش هاي ميكروبيولوژيك لازم در اين بخش ها را يادآور مي شود.

Background & Objectives: Pseudomonas aeruginosa is one of the important nosocomial Gram-negative bacilli which are resistant to most of antimicrobial agents and antibiotics. This opportunistic bacterium is capable of causing life threatening infections in patients, especially in those with immunodeficiency such as those in ICUs and burn wards. This study was conducted to detect antibiotic susceptibility and also molecular typing of P. aeruginosa isolates from burn infections by using RAPD (Random amplified polymorphic DNA). Materials & Methods: Totally 124 P. aeruginosa isolates collected from burn patients consisting of burn infection discharge and blood specimens by application of conventional microscopic, culture and biochemical identification tests. The collected isolates were studied for their antibiotic susceptibility patterns using routine antibiotics ceftazidim (30 μg), aztreonam (30 μg), carbenicillin (100 μg), polymixin B(300 u), colistin(100 μg), gentamicin(10 μg) and ciprofloxacin(5 μg) by disc agar diffusion method and detection of genotypes by two short primers namely 272(5’-AGCGGCCAA-3’) and 208(5’-ACGGCCGACC-3’) according to RAPD-PCR method. Results: Results of antibiotic susceptibility tests showed high resistance to aztreonam (70.1%), ceftazidime (66.1%), colistin (61.2%) and gentamicin (47.5%), but less resistance to ciprofloxacin(18.5%) and polymixin B(13.7%). Based on antibiotic susceptibility 41 patterns were detected. RAPD-PCR created 32 genotypic profiles with base pair length ranging from 250 to 10000. Each genotype showed between 1 and 8 different weight DNA bands. Genotype 3 was the most prevalent, identified in 42 isolates (33.8%) and accommodated isolates with similar antibiotic susceptibility patterns, while in other genotypes no similar susceptibility patterns were encountered. Conclusion: Our P. aeruginosa isolates collected from burn infections were most resistant to aztreonam (70.1%), but least resistant to polymixin B (13.7%). The test isolates showed 41 antibiotic susceptibility patterns and 32 RAPD genotypes. Genotype 3 was the most prevalent and accommodated isolates with similar antibiotic susceptibility patterns, but in other genotypes, isolates with similar antibiotic susceptibility patterns was not detected. Some isolates with similar antibiotic patterns underline possibility of their transfer among burn patients and suggest need for restricted conditions and microbiologic surveillance in the burn wards.