تأثير نيترات نقره بر تكثير درون شيشه‌اي ارقام انار ملس يزدي و رباب

Effect of Silver Nitrate on In vitro Propagation of Pomegranate (Punica granatum L.) cvs. ‘Malas Yazdi’ and ‘Robab’

روش تكثير سنتي انار با استفاده از قلمه خشبي و نرم باعث توليد گياهان عاري از بيماري نمي‌شود و وابسته به فصل نيز مي‌باشد. بنابراين توسعه يك تكنيك درون شيشه‌اي كارآمد براي تكثير انار اهميت زيادي دارد. از طرف ديگر، تكثير درون شيشه‌اي انار يك مرحله ضروري در موفقيت باززايي لاين‌هاي تراريخته بوده و كارايي پروتوكل تراريختگي را تعيين مي‌كند. بنابراين، اين تحقيق با هدف توسعه يك روش كارآمد درون شيشه‌اي براي تكثير ارقام انار ملس يزدي و رباب به‌عنوان دو رقم برتر ايراني انجام شد. براي مرحله پرآوري، محيط كشت دابليوپي‌ام حاوي غلظت‌هاي مختلف بنزيل آدنين (2/2، 4/4، 8/8 و 17/6 ميكرومولار) همراه با 0/54 ميكرومولار نفتالين استيك اسيد استفاده گرديد. براي تعيين اثرات نيترات نقره روي تكثير درون شيشه‌اي، ريزنمونه‌ها به محيط دابليوپي‌ام حاوي 8/8 ميكرومولار بنزيل آدنين و 0/54 ميكرومولار نفتالين استيك اسيد كه سطوح مختلفي از نيترات نقره (35-5 ميكرومولار) به آن اضافه شده بود، منتقل شدند. براي هر دو رقم، بهترين غلظت بنزيل آدنين 8/8 ميكرومولار بود كه منجر به بيشترين طول شاخساره (3/91 سانتي‌متر)، تعداد برگ (10/60) و تعداد گره (4/30) در ريزنمونه‌ها شد. اضافه كردن 25 ميكرومولار نيترات نقره به اين محيط كشت به طور معني‌داري تعداد شاخساره (4/90)، طول شاخساره (4/24 سانتي‌متر)، تعداد برگ (12/30) و تعداد گره (6/10) را افزايش داد. محيط نصف غلظت دابليوپي‌ام حاوي 5/4 ميكرومولار نفتالين استيك اسيد موثرترين محيط براي ريشه‌زايي شاخساره‌ها بود. گياهان ريشه‌دار شده به‌طور موفقيت‌آميزي پس از سازگاري تدريجي به خاك منتقل گرديدند. گياهان حاصل از نظر مورفولوژيكي شبيه به هم بوده و صفات رويشي مشابه با گياهان مادري نشان دادند. نتايج اين تحقيق مي‌تواند به‌عنوان يك مرحله براي اصلاح انار با استفاده از روش‌هاي مهندسي ژنتيك استفاده شود.

Background and Objectives Traditional propagation method of pomegranate by hard wood and soft wood cuttings does not ensure disease-free and healthy plants and it depends on the season. Hence, developing an efficient in vitro technique for the propagation of pomegranate is of great importance. On the other hand, in vitro propagation of pomegranate is also an essential step in the success of regeneration of transgenic lines and determines the effectiveness of a transformation protocol. Therefore, this study was performed to develop an efficient in vitro propagation method for ‘Malas Yazdi’ and ‘Rabab’, two Iranian leading pomegranate cultivars. Materials and methods For proliferation stage, WPM media supplemented with different concentrations (2.2, 4.4, 8.8 and 17.6 μM) of benzyladenine (BA) along with 0.54 μM NAA was used. To determine the effect of silver nitrate on in vitro propagation, explants were transferred to WPM medium containing 8.8 μM BA and 0.54 μM NAA supplemented with various levels of AgNO3 (5–35 μM). Results For both cultivars, the best concentration of benzyladenine (BA) was 8.8 μM resulting in the highest shoot length (3.91 cm), leaf number (10.60) and node number (4.30). Adding 25 μM silver nitrate (AgNO3) to this medium significantly enhanced shoot number (4.90), shoot length (4.24), leaf number (12.30) and node number (6.10). Half-strength WPM medium supplemented with 5.4 μM NAA was most effective for rooting of shoots. Rooted plantlets were successfully acclimatized and transferred into soil. The micropropagated plants were morphologically uniform and exhibited similar growth characteristics and vegetative morphology to the mother plants. Discussion The result of this research may be used as a step for breeding of pomegranate using genetic engineering approaches.