تشخيص مولكولي گونه ي Biscogniauxia mediterranea، عامل بيماري ذغالي بلوط، با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي

چكيده گونه ي Biscogniauxia mediterranea، عامل بيماري ذغالي بلوط، به عنوان يكي از عوامل اصلي دخيل در زوال بلوط در ايران معرفي شده است. با اين حال اطلاعاتي در مورد پراكنش، دامنه ي ميزباني، روش هاي انتشار و انتقال عامل بيماري در مناطق آلوده و همچنين احتمال شيوع بيماري در ساير مناطق جنگلي ايران در دسترس نمي باشد. تحقيق حاضر با هدف توسعه ي يك روش مولكولي مبتني بر واكنش زنجيره اي پلي مرازي جهت تشخيص گونه ي B. mediterranea براساس آغازگرهاي اختصاصي گونه، اجرا گرديد. بدين منظور نمونه برداري از درختان بلوط با علايم بيماري ذغالي در استان ايلام صورت گرفت. عامل بيماري با استفاده از تكنيك هاي متعارف در بيماري-شناسي گياهي جداسازي و خالص سازي گرديد. جدايه هاي Biscogniauxia براساس ويژگي هاي ريخت شناختي مرحله ي جنسي و توالي يابي ناحيه ITS-rDNA گونه ي B. mediterranea شناسايي گرديدند. داده هاي توالي ناحيه ي ITS-rDNA براي كليه ي گونه هاي Biscogniauxia موجود در بانك ژن دريافت و همراه با توالي هاي ايجاد شده در اين تحقيق زير هم چيني و يك جفت آغازگر اختصاصي (BmF/BmR) با طول قطعه ي مورد انتظار400 جفت باز، براي تشخيص مولكولي B. mediterranea طراحي گرديد. كارايي جفت آغازگر طراحي شده با استفاده از DNA جدايه هاي B. mediterranea و ديگر گروه هاي قارچي جداسازي شده از بافت هاي درختان بلوط طي واكنش زنجيره اي پلي مرازي ارزيابي گرديد. نتايج حاصل از بررسي محصول واكنش روي ژل آگارز نشان داد كه قطعه 400 جفت بازي فقط از جدايه هاي گونه ي B. mediterranea تكثير مي‌شود. آغازگرهاي اختصاصي طراحي شده در اين تحقيق در برنامه هاي مربوط به رديابي عامل بيماري، مطالعه ي پراكنش، دامنه ي ميزباني و روش هاي انتشار عامل بيماري قابل استفاده خواهند بود. واژه هاي كليدي: اندوفيت، بيماري نوظهور، زوال بلوط، زايلارياسه.

Abstract Biscogniauxia mediterranea, the cause of charcoal rot disease on oak, is known as one of the main agents involved in oak decline in Iran. However, very little is known on the extent of distribution, host range and mechanisms of dispersal of the pathogen in infected areas as well as incidence of the disease in other regions of country. The present study was aimed to develop a diagnostic tool for molecular identification and detection of the causal agent of charcoal rot disease based on species-specific primer set using polymerase chain reaction. To this aim, samples were collected from oak trees with typical charcoal rot disease from Ilam province. The causal agent was isolated and purified using routine plant pathology methods. Biscogniauxia isolates were identified using a combination of morphological and sequence data from ITS-rDNA region. Blast search analysis of the sequence data obtained in this study against the sequence data in GenBank confirmed the identity of the isolates as B. mediterranea. Seqeunce data of ITS-rDNA region for all of Biscogniauxia were obtained from GenBank and aligned together with seqeunce data gnerated in this study. A pair of species-specific primer (BmF/BmR) with expcted amplicon size of 400 bp was designed for B. mediterranea. Efficacy of this primer set was tested and verified on DNA extracted from B. mediterranea and other fungal species isolated from oak tree tissues.The results of amplication profile showed that a 400 bp band was amplified only from B. mediterranea isolates. The species-specific primer set designed in this study can be used in monitoring programmes for the detection of the causal agent, the extent of distribution and mechanisms of dispersal of the pathogen. Keywords: Endophyte, New emerging disease, Oak decline, Xylariaceae.