طراحي و ساخت يك سازه ي ژني نوتركيب بيان كننده ي پروتيين p24 ويروس لكوز گاوي در اشرشياكلي

Design and construction of a recombinant gene construct expressing bovine leukemia virus p24 protein in Escherichia coli

لكوز انزيوتيك گاوي (EBL) يك بيماري رتروويروسي است كه به وسيله ي ويروس لكوز گاوي (BLV) ايجاد و عموماً در دامداري‏هاي صنعتي مشاهده مي‏ شود. اين بيماري موجب كاهش توان توليد و بروز خسارت ‏‏هاي اقتصادي قابل توجه در گله مي‏ شود. كنترل عفونت ‏هاي ناشي از BLV با انجام آزمايش‏ هاي سرولوژي، شناسايي و جداسازي يا حذف حيوانات سرم مثبت انجام مي‏ گردد. در اين مطالعه، ژن پروتيين p24 از BLV پس از تكثير توسط PCR، به پلاسميد بياني پروكاريوتي pMalc2x منتقل و در سويه ي DH5a از اشرشياكلي بيان شد. بيان پروتيين نوتركيب با استفاده از روش SDS-PAGE و متعاقب آن وسترن بلات (ايمونوبلات) بررسي شد. وزن مولكولي پروتيين بيان شده (63 كيلودالتون) با وزن مولكولي مورد انتظار از پروتيين فيوژن، مطابقت داشت. آناليز وسترن بلات نشان‏ داد كه پروتيين p24 بيان شده به طور اختصاصي با يك سرم مثبت تجاري حاوي آنتي ‏بادي ضد BLV واكنش مي دهد. بنابراين در اين مطالعه پروتيين p24 از ويروس لكوز گاوي با موفقيت توسط سازه ي نوتركيب p24-pMalc2x در اشرشياكلي بيان گرديد.

Enzootic bovine leukemia (EBL) is a retroviral disease which is caused by bovine leukemia virus (BLV) and typically occurs in the industrial farms. The disease reduces the productivity of animals and therefore causes considerable economic losses in herd. BLV infections control program is consisted on serological assays, identification and isolation or culling the seropositive animals. In this study, the gene encoding p24 protein of BLV was amplified by PCR, ligated into the prokaryotic expression vector, pMalc2x, and subsequently expressed in DH5a strain of Escherichia coli. Expressed recombinant protein was analyzed using SDS-PAGE and western blotting (immunoblot) assay. Molecular weight of the expressed protein (63 kDa) was consistent with the expected molecular weight of maltose binding protein-p24 fusion protein. Western blotting analysis showed that the expressed p24 protein specifically reacted with a positive anti-BLV commercial serum. Thus, in this study the p24 protein of BLV was successfully expressed by the pMalc2x-p24 recombinant construct in Escherichia coli.