مقايسه ي تكثير و پاساژهاي متوالي تاكي زوييت هاي نيوسپورا كنينوم در سل لاين هاي Vero و TLI

Comparison of propagation and continuous passages of Neospora caninum tachyzoites in Vero and TLI cell lines

نيوسپورا كنينوم يك عامل بيماري زاي مهم در گاو و سگ مي باشد.امروزه به طور گسترده اي از كشت سلولي به منظور جداسازي و تكثير نيوسپورا براي اهداف مختلفي استفاده مي شود. در مطالعه ي حاضر، ميزان يكساني از تاكي زوييت انگل در مجاورت ميزان يكساني از سل لاين هاي Vero (سلول اپيتليال كليه ي ميمون سبز آفريقايي) و سل لاين TLI (لنفوسيت ترانسفورم شده با تيلريا) قرار گرفت و به مدت سه ماه پاساژ متوالي داده شدند. به منظور ارزيابي ميزان حدت تاكي زوييت هاي به دست آمده از هر سل لاين، دوزهاي مختلف انگل (5000، 10000 و 15000 تاكي زوييت در هر ميكروليتر)، به تخم مرغ جنين دار تزريق شد و ميزان تلفات ثبت و از بافت هاي مغز، قلب و كبد آن ها جهت مطالعات هيستوپاتولوژي و مولكولي نمونه برداري انجام شد. نتايج اين مطالعه نشان داد كه سل لاين TLI توان تكثير مناسبي را براي نيوسپورا نسبت به سل لاين Vero دارد و اختلاف آماري معني داري در تعداد تاكي زوييت هاي رها شده از دو سل لاين مشاهده نشد (0.05 < p). نتايج ميزان تلفات، مرگ و مير 100 درصد در تخم مرغ هاي تلقيح شده به وسيله ي دوزهاي مختلف تاكي زوييت هاي به دست آمده از هر دو سل لاين را نشان داد كه البته اين ميزان تلفات، وابسته به دوز تلقيح شده بود؛ بدين صورت كه در دوزهاي بالاتر، تلفات زودتر مشاهده شد. بررسي هاي هيستوپاتولوژيك، هپاتيت و ميوكارديت غيرچركي تك هسته اي را نشان داد. با مطالعات مولكولي و ايمنوهيستوشيمي حضور آنتي ژن و ژنوم نيوسپورا در بافت هاي مختلف تاييد شد. يافته هاي اين پژوهش، سل لاين مناسبي را جهت تكثير و پاساژ متوالي نيوسپورا كنينوم معرفي مي كند كه مي تواند در دستيابي به روش سريع تر و موثرتر جهت تهيه واكسن زنده و همچنين صرفه جويي در زمان و هزينه ها بسيار كمك كننده باشد.

Neospora caninum causes major bovine abortions and neonatal mortality in cattle, sheep, goat and horse. Vero cells are the most frequently used cell line for culture of Neospora caninum but problems are with propagation and required level of nutritional components for the media persist. In this study the tachyzoite yields of N. caninum were compared in two cell lines: Vero (African green monkey kidney) and suspension culture Theileria lestoquardi-infected lymphoblastoid (TLI) cell lines. Then, N. caninum were continuously passaged in these cell lines for 3 months and the effect of host cells on virulence of tachyzoites was assessed by broiler chicken embryonated eggs. Inoculation was performed in the chorioallantoic (CA) liquid of the embryonated eggs with different dilutions (5000, 10000, 15000 / µl) of tachtzoites isolated from these cell cultures. The mortality pattern and pathological changes of the dead embryos and hatched chickens were noted. Tissue samples of brain, liver and heart were examined by histopathological and detection of DNA of parasite by polymerase chain reaction (PCR). Also, consecutive sections of the tissues examined histologically were used for immunohistochemical (IHC) examination. Results of the present study did not show any significant differences in number of tachyzoites harvested from both cell line and also in mortality rate of inoculated embryonated eggs. Attenuation of virulence after 3 months continuous passages of suspension culture of TLI cell line was not different with Vero cell line which the results were confirmed by histopathology, IHC and PCR. Continuous passage of Neospora caninum in both cell lines suggesting that TLI cells could be used for vaccine production.