ارزيابي توان آنتاگونيستي سودوموناس‌هاي فلورسنت ريزوسفر سيب‌زميني در كنترل Ralstonia solanacearum در شرايط گلخانه

Assessment of antagonistic activity of fluorescent pseudomonads isolated from potato rhizospher towards Ralstonia solanacearum under greenhouse conditions

اين پژوهش، با هدف ارزيابي توان آنتاگونيستي باكتري‌هاي Pseudomonas fluorescent عليه Ralstonia solanacearum عامل پژمردگي باكتريايي سيب‌زميني در گلخانه انجام شد. تعداد 80 استرين سودوموناس روي محيط كشت King,s B از خاك پيرامون ريشه و غده سالم گردآوري شده از 10 مزرعه جدا شد. باكتريR. solanacearum از سيب‌زميني آلوده روي محيط كشت اختصاصي داراي تري فنيل تترازوليوم كلرايد (TTC) جداسازي شد. توانايي استرين‌هاي باكتري‌هاي P. fluorescent در جلوگيري از رشد بيمارگر با استفاده از آزمون كشت سه نقطه‌اي و اندازه‌گيري هاله بازدارنده در قالب طرح كاملاً تصادفي با سه تكرار بررسي شد. نتايج نشان داد كه استرين‌هاي EH87، EH203 با ميانگين قطر هاله بازدارنده 78/3 و 65/3 سانتي‌متر و استرين‌هاي EH27 و EH40 با ميانگين قطر هاله بازدارنده 85/1 و 54/1 سانتي‌متر به ترتيب بيشترين و كمترين درصد بازدارندگي از رشد را نشان دادند. بر مبناي نتيجه آزمايش بازدارندگي در آزمايشگاه از ميان استرين‌هاي بررسي شده، تعداد نه استرين به عنوان نماينده براي بررسي‌هاي گلخانه‌اي انتخاب شدند. نتايج تعيين ويژگي‌هاي فنوتيپي و واكنش فوق حساسيت در بر‌گ‌هاي توتون نشان داد كه اين نه استرين به گونه‌هاي Pseudomonas putida و بيووارهاي يك، دو و چهارP. fluorescens تعلق دارند. توان آنتاگونيستي استرين‌هاي سودوموناس‌هاي فلورسنت عليه باكتريR. solanacearum در شرايط گلخانه با روش آغشته‌سازي نشا در قالب طرح بلوك كامل تصادفي با سه تكرار بررسي و فاكتور‌هاي رشد پس از سه ماه اندازه‌گيري و ثبت شد. نتايج نشان داد كه استرين‌هاي EH70، EH49 كارايي بيوكنترلي بالايي نسبت به شاهد آلوده داشته و توانستند به ترتيب ميزان بيماري را 84 و 75 درصد كاهش دهند. ژن‌هاي كد كننده 16SrRNA استرين‌هاي برگزيده با استفاده از پرايمرهاي همگاني توسط PCR تكثير و سپس توالي يابي شد. نتايج نشان داد كه استرين EH53، 98 درصد به باكتري‌هاي، Pseudomonas fluoresent شباهت دارد.

This study was conducted to evaluate of the antagonistic activity of fluorescent pseudomonads against Ralstonia solanacearum in greenhous. A total of 80 strains of fluorescent pseudomonads were isolated from the soil around the healthy potato roots and tubers collected from 10 farms on King, s B medium (KB). The bacterial R. solanacearum strains were isolated on nutreient agar (NA) medium containing triphenyltetrazolium chloride (TTC). Antagonistic activity of pseudomonads strains was evaluated in a completed randomized design with three replicates in vitro. The bacterial strains EH87 and EH203 with 3.78 and 3. 65 cm growth inhibition zone were the most effective and EH27 and EH40 strain with 1. 85 and 1.54 cm had the least effect. The phenotypic feature of the antagonistic representative’s strains and their hypersensitive reaction on tobacco leaf showed that they were belonged to Pseudomonas putida and P. fluorescens (bv. I, II & IV). Based on the result of laboratory experiment nine representative strains were selected for further studies in a randomized design under greenhouse condition. After three months, growth factors of the plants and disease severity were measured and recorded. Results showed that EH70, EH49 bacterial strains had a high biocontrol effect in compare to contaminated control. They reduced the potato wilt disease caused by R. solanacearum 84% and 75% respectively. Total DNA from antagonistic representaives strains were used as a template to amplify 16SrRNA encoding gene using universal primers in PCR. Results showed that the strain EH53 had 98 percent sequence similarity to Pseudomonas fluoresens.