شناسايي مولكولي فاكتورهاي حدت اشريشيا كلي در سه سويه ETEC ،EHEC و EPEC در گوساله‌ها و بره‌هاي مبتلا به اسهال در شيراز

Molecular Identification of Virulence Factors of E. coli in Three Strains of ETEC, EHEC and EPEC in Calves and Lambs with Diarrhea in Shiraz

اسهال ناشی از سویه‌های پاتوژن اشریشیاكلی (ETEC،EHEC و EPEC) در گوساله‌ها و بره‌ها به‌ویژه در نخستین روزهای پس از تولد، به علت تلفات و خسارات اقتصادی حاصله از اهمیت زیادی برخوردار است. در طی این تحقیق 200 سوآب ركتوم از گوساله‌ها ‌و بره‌های یك تا 30 روزه مبتلا به اسهال در مدت یك سال (1392تا 1393) در شهرستان شیراز جمع‌آوری شد. نمونه‌ها بر روی محیط‌های مك‌كانكی‌آگار و ائوزین-متیلن‌بلو و مینكا كشت داد شد. در این مطالعه شیوع ژن‌های بیماری‌زای اشریشیاكلی انتروتوكسیژنیك (F41 ،K99، وSTa) اشریشیا كلی انتروهموراژیك (Stx1، Stx2 و eae) و اشریشیا كلی انتروپاتوژنیك (eae و bfpb) با استفاده از تكنیك Multiplex PCR بررسی شد. نتایج نشان داد از 133 اشریشیاكلی جداشده 03/12 درصد دارای هرسه ژن بیماری‌زای ETEC و سه درصد دارای هر سه ژن بیماری‌زای EHEC می‌باشند. همچنین تعیین توالی ژن‌ حدت K99 نشان داد كه توالی نوكلئوتیدی آن‌ها، 97 تا 100 درصد با توالی‌های نوكلئوتیدی رفرنس‌های موجود در بانك ژنی شباهت دارد. پراكندگی شیوع عفونت با سه سویه مذكور در مناطق مختلف جهان متفاوت می‌باشد. این تفاوت‌ها می‌‌تواند ناشی از عوامل مدیریتی، سن گوساله‌ها، زمان دریافت آغوز، حجم و كیفیت آن و واكسیناسیون مادران باردار باشد.

Pathogenic E.coli (ETEC, EHEC and EPEC) cause diarrhea in new born calves and lambs are important especially due to mortality rate and high economic losses. In this study 200 rectal swab samples were collected from 1-30 day-old calves and lambs with diarrhea during 2013-2014 in Shiraz. The samples were inoculated on Mac Conkey, EMB and Minca agar media. The presence of various virulence genes of ETEC (k99, F41 fimbria and Sta), EHEC (Stx1, Stx2 and eae) and EPEC (bfpb and eae) was investigated using multiplex PCR. The PCR test results showed that out of 133 E. coli isolates, 12.03% and 3% possessed all three virulence genes of ETEC and EHEC, respectively. The sequencing of K99 gene showed 97-100% homology between the isolates. The variety of ETEC, EPEC and EHEC prevalence has been reported in the world. These variations could be due to managing factors, calves age, colostrum intake and dam vaccination.