رديابي و بررسي مولكولي دو جدايه جديد ويروس موزائيك ايراني قياق (IJMV) در مزارع ذرت استان مازندران

Detection and Molecular Characterization of Two New Isolates of Iranian johnsongrass mosaic virus in Corn Fields of Mazandaran Province

پوتي ويروس ها متعلق به خانواده Potyviridae يكي از بزرگ ترين گروه هاي ويروس هاي گياهي با بيش ترين اهميت اقتصادي بوده و عامل 40درصد بيماري هاي ويروسي در گياهان مختلف مي باشند. ويروس موزائيك ايراني قياق (IJMV) از پوتي ويروس هاي مهم غلات مي باشد و يكي از عوامل مهم موزائيك ذرت در ايران به شمار مي رود. به منظور بررسي اين ويروس، طي سال هاي 1393-1392 تعداد 90 نمونه داراي علائم ويروسي از مزارع ذرت استان مازندران جمع آوري و با آزمون الايزاي غير مستقيم توسط آنتي سرم اختصاصي ويروس مذكور مورد بررسي قرار گرفت. RNA ويروس از نمونه هاي الايزا- مثبت استخراج شد، و در آزمون RT-PCR با استفاده از آغازگرهاي دژنره مربوط به ناحيه ژنومي cylindrical inclusion (CI) اعضاي جنس پوتي ويروس، قطعه اي به طول 680 جفت باز تكثير شد. به منظور بررسي هاي تكميلي، محصول PCR دو جدايه از شهرستان بابلسر پس از همسانه سازي در حامل پلاسميدي pTG19-T، توالي يابي شدند. نتايج داده هاي ترادف نوكلئوتيدي در BLASTn وجود IJMV را تاييد نمود. با مقايسه و تجزيه توالي به دست آمده با جدايه هاي موجود در بانك ژن، مشخص شد كه دو جدايه تعيين توالي شده بيش ترين شباهت را در سطح نوكلئوتيدي (84.2 درصد) و آمينو اسيدي (97.8 و 97.3 درصد) با جدايه شيراز (با شماره دسترسي JQ692088) كه ميزبان آن قياق مي باشد، دارند. اختلاف نوكلئوتيدي زياد جدايه هاي به دست آمده از ذرت در مقايسه با جدايه به دست آمده از قياق نشان دهنده تنوع ژنتيكي بالاي اين ويروس است. نتايج اين تحقيق، وقوع و گسترش IJMV در استان مازندران را با روش هاي سرولوژيكي، مولكولي و توالي يابي بخشي از ژن CI اثبات مي كند.

The genus Potyvirus is one of the largest and economically important groups of plant viruses، due to their effects on crops worldwide. Potyviruses are accounted for 40% of viral diseases of various plants. Iranian johnsongrass mosaic virus (IJMV) is one of the important potyviruses infecting cereal crops and one of the main causal agents of maize mosaic in Iran. In order to study the this virus، 90 samples showing virus-like symptoms were collected from different maize fields in Mazandaran province during 2013-2014 and evaluated with DAS-ELISA test using polyclonal specific antibody. RT-PCR assay with degenerate primers corresponding to the virus CI gene led to the amplification of the expected DNA fragment with a length of 680 bp in all ELISA-positive samples. Two fragments were cloned in a pTG19-T vector and sequenced. BLAST analysis of the sequenced data confirmed that the PCR-amplified fragments belonged to IJMV. Phylogenetic analysis based on partial sequences of CI gene showed that these two isolates of IJMV had the highest nucleotide (84.2%) and amino acid (97.3%، 97.8%) identities and a close phylogenetic relationship with another Iranian isolate of IJMV namely Shz (JQ692088) isolated from Johnsongrass and previously reported from Shiraz. High-nucleotide differences between the IJMV isolates obtained from maize and Shz isolate from johnsongrass indicating high nucleotide variability of this potyvirus. These results demonstrated the occurrence and spread of IJMV in the maize fields of Mazandaran province based on serological test، RT-PCR، and CI gene analyses.