شناسايي گونه هاي مالاسـزيا در مبتلايان به پيتيريازيس ورسيكالر با روش مولكولي PCR-RFLP

چكيـده زمينه و هدف: مالاسزياها، مخمرهايي هستند كه در شرايط خاص به عواملي بيماري زا در انسان تبديل مي شوند. مالاسزياها داراي گونه هاي مختلفي بوده و مي توانند بيماري هايي نظير پيتيريازيس ورسيكالر(تينه آورسيكالر)، فوليكوليت مالاسزيايي، درماتيت سبوروييك و حتي عفونت هاي سيستميك را ايجاد كنند. در مطالعه حاضر، مالاسزياهاي جدا شده از مبتلايان به پيتيريازيس ورسيكالر با روش مولكولي شناسايي شدند. روش بررسي: در اين مطالعه، پوسته هاي سر و بدن مبتلايان مشكوك به پيتيريازيس ورسيكالر بر روي محيط كشت ديكسون آگار كشت داده شده و در نهايت 100 كلني مالاسزيايي بدست آمد. ژنوم كلني هاي مالاسزياها پس از استخراج توسط روش فنل كلروفرم، بر اساس روش مولكولي PCR-PFLP مورد مطالعه قرار گرفتند. در اين روش، قطعه D1-D2 در ناحيه ي 26S rDNA از ژن ITS توسط پرايمرهاي اختصاصي تكثير گرديد و توسط آنزيم محدودالاثر CfoI، قطعات با الگوي هاي مشخص براي هر گونه ي مالاسزيا به دست آمد. يافته ها: ايزوله هاي مالاسزيا شناسايي شده در نمونه هاي باليني به ترتيب داراي 44% مالاسزيا گلوبوزا،27% مالاسزيا گلوبوزا/ مالاسزيا رستريكتا، 11% مالاسزيا رستريكتا، 7% مالاسزيا سيمپودياليسپ ، 4% مالاسزيا سيمپودياليس/ مالاسزيا رستريكتا، 1% مالاسزيا فورفور/ مالاسزيا گلوبوزا/ مالاسزيا رستريكتا، 1% مالاسزيا سيمپودياليس/ مالاسزيا گلوبوزا/ مالاسزيا رستريكتا بودند. 5% از گونه ها نيز بصورت ناشناخته باقي ماندند. نتيجه گيري: گونه هاي غالب مبتلايان به پيتيريازيس ورسيكالر، به ترتيب مالاسزيا گلوبوزا، مالاسزيا رستريكتا و مالاسزيا سيمپودياليس بودند. 33 درصد از نمونه ها داراي بيش از يك گونه مالاسزيا بودند، اگر چه روش PCR-RFLP براي شناسايي اغلب گونه هاي مالاسزيا بود، ولي 5% از ايزوله ها قابل شناسايي نبودند. كليـد واژه ها: مالاسزيا، پيتيريازيس ورسيكالر،PCR–RFLP

ABSTRACT Background and Aim: Malassezia yeast can become pathogenic under certain conditions in humans. Malassezia has various species which can cause a number of skin diseases, such as pityriasis versicolor (tinea versicolor), seborrheic dermatitis and folliculitis and even systemic infections. In the present study, Malassezia species isolated from the patients with pityriasis versicolor were identified by PCR-PFLP molecular method. Material and Methods: In this study, the scraping specimens of the trunk and scalp of the patients with pityriasis versicolor were cultured on Dixon agar medium. Finally, one-hundred Malassezia colonies were obtained. The genomic DNA was extracted by phenol–chloroform method and then was studied by use of PCR-PFLP molecular method. D1-D2 segment in the area of 26srDNA of ITS gene was proliferated by specific primers and then the PCR products were exposed to CfoI restrictive enzyme. Results: Among 100 Malassezia colonies, the most common Malassezia species were; M. globosa (44%), M. globosa/M. restricta (27%), M. restricta (11%), M. sympodialis (7%), M. sympodialis/M. restricta (4%), M. globosa/M. restricta/M. furfur (1%), M. sympodialis/M. restricta/ M. globosa (1%) and unknown species (5%). Conclusion: The dominant species isolated from patients with pityriasis versicolor were M. globosa, M. restricta and M. sympodialis, respectively. Thirty-three percent of the specimens had more than one Malassezia species. Therefore, rapid PCR-RFLP method is recommended for identification of Malassezia species in epidemiological studies and production of more effective medicines. Key words: Malassezia; Pityriasis versicolor; PCR-RFLP. Received: Oct 1, 2016 Accepted: Feb 11, 2017