تأثير بوتيليتد هيدروكسي آنيزول (BHA) و بوتيليتيد هيدروكسي تولوئن (BHT) بر فراسنجه‌هاي كيفي اسپرم قوچ پس از فرآيند انجماد و يخ گشايي

Effect of Butylated Hydroxy Anisole (BHA) and Butylated Hydroxy Toluene (BHT) on semen quality of Ram semen after freeze thawing Process

هدف از انجام اين پژوهش، بررسي تأثير غلظت­ هاي مختلف بوتيليتد هيدروكسي تولوئن (BHT) و بوتيليتد هيدروكسي آنيزول (BHA) بر فراسنجه­ هاي كيفي اسپرم قوچ پس از فرآيند انجماد-يخ‌‌گشايي است. به اين منظور، از چهار رأس قوچ بالغ و سالم نژاد سافولك (4–2/5 سال) به مدت سه هفته و هر هفته دو نوبت اسپرم­ گيري شد. پس از ارزيابي اوليه، نمونه­ هاي مني با هم مخلوط و بر پايۀ غلظت مورد نياز به هشت قسمت تقسيم شدند. سپس نمونه ­ها با تيمارهاي آماده‌شده [شامل: شاهد منفي (بدون پاداكسنده يا آنتي­اكسيدان و حلال)، شاهد مثبت (بدون پاداكسنده با افزودن حلال) و سطوح 0/5، 1 و 2 ميلي‌مول از پاداكسنده­ هاي BHA و BHT، هركدام در قالب يك تيمار)] رقيق‌ و به مدت 150 دقيقه در دماي 4 درجۀ سلسيوس به تعادل رسيده و به ني (پايوت)­هاي ويژه 0/25 ميلي­ليتري كشيده شدند. پس از آن ني­ ها منجمد و براي ذخيره­ سازي به تانك نيتروژن منتقل شدند. پس از يخ ­گشايي، فراسنجه­ هاي كيفي اسپرم شامل جنبايي، زنده‌ماني و يكپارچگي غشاي پلاسمايي ارزيابي شدند. نتايج به‌دست‌آمده از اين آزمايش نشان مي­دهد، افزودن 2 ميلي ­مول BHA به رقيق­ كنندۀ اسپرم قوچ سبب بهبود جنبايي كل نسبت به گروه­هاي شاهد مثبت و منفي شده است (0/01>P). همچنين، تيمار 2 ميلي­مول BHA سبب افزايش جنبايي پيش­رونده و يكپارچگي غشاي اسپرم نسبت به ديگر گروه ­ها شده است (0/05>P)، اما زنده‌ماني تيمارهاي حاوي سطوح مختلف BHA و BHT تفاوت معني­داري با گروه ­هاي شاهد مثبت و منفي نداشت (0/05

The aim of this study was to evaluate the effects of different concentration of Butylated hydroxy toluene (BHT) and Butylated hydroxyanisole (BHA) on freezing capacity of Rams semen. Semen of four healthy mature ram (2.5 - 4 years) was collected, twice a week for three weeks. Collected semen samples were pooled after primary evaluation and divided into 8 groups. Then samples were diluted with one of the treatments [ including negative control (without antioxidants and DMSO), positive control (without antioxidants, with DMSO), BHA-0.5 (containing 0.5 mM BHA), BHA-1 (containing 1 mM BHA), BHA-2 (containing 2 mM BHA), BHT-0.5 (containing 0.5 mM BHT), BHT-1 (containing 1 mM BHT) and BHT-2 (containing 2 mM BHT)] and were equilibrated at 4 ºC for 150 min. Afterward the cooled semen were loaded into 0.25 mL straws and were frozen in liquidnitrogen vapor. Motion characteristic (using CASA: Computer Assisted Sperm Analysis), viability and membrane integrity were assessed after thawing. The results of this study showed that addition of 2mM BHA to the extender could significantly increase total motility compared to the negative and positive control treatments (P>0.01).Also addition of 2 mM BHA significantly improved the progressive motility and membrane integrity compared to rest of the groups (P>0.05). However, different levels of BHA and BHT have not shown any significant difference in viability of ram sperm (P>0.05). So it is concluded that the addition of 2 mM BHA to the extender could improves the freezability of Ram semen.