توليد پروتيين نوكليوكپسيد نوتركيب ويروس برونشيت عفوني طيور سويه ي ماساچوست H120

Expression Of Nucleocapsid Gene Of Chicken Infection Bronchitis Virus Strain Massachuset H120

برونشيت عفوني يكي از مهم ترين بيماري هاي ويروسي ماكيان است، كه به علت ايجاد مشكلات تنفسي با حدت بالا، نفريت، كاهش و توليد تخم هاي غيرعادي خسارات اقتصادي قابل توجهي به صنعت پرورش طيور در سرتاسر جهان وارد مي كند. اين بيماري درمان ندارد و تنها راه پيشگيري واكسيناسيون مي باشد. ايمنيت ضد برونشيت عفوني اكثراً به وسيله ي آزمايش هاي سرولوژيكي از جمله الايزا سنجيده مي شود. ويروس برونشيت عفوني طيور (جنس كروناويروس، خانواده ي كروناويريده) داراي يك رشته RNA مثبت به طول 6/27 كيلو باز مي باشد. يكي از پروتيين هاي ساختاري كد شده توسط ژنوم ويروس فسفوپروتيين نوكليوكپسيد با وزن 43 تا 50 كيلودالتون (KD) مي باشد. هدف از اين مطالعه تهيه ي پروتيين نوكليوكپسيد (Nucleocapsid) نوتركيب جهت استفاده در كيت هاي تشخيصي به عنوان جايگزين ويروس كامل مي باشد. براي اين هدف بعد از استخراج RNA از ويروس، ژن مورد نظر با طول 1227bp به وسيله ي RT-PCR تكثير شد. سپس اين ژن در يك پلاسميد بياني (pMAL-C2X) كلون شد و پلاسميد نوتركيب به سويه ي Rosetta باكتري E.coli منتقل شد. بيان پروتيين نوكليوكپسيد به وسيله ي روش SDS-PAGE بررسي شد. نتايج حاصل از اين بررسي حاكي از بيان با غلظت بالاي اين پروتيين نوتركيب در سيستم باكتريايي مي باشد.

Infectious bronchitis (IB) is one of the most important viral diseases of poultry that causes significant economic loses to chicken industry worldwide. Infectious Bronchitis Virus causes a contagious and acute respiratory disease. Some nephrotropic serotypes of IBV cause nephritis. IBV is responsible for decrease of egg production and laying abnormal eggs. IB has no treatment and the only way to protect the chicken flocks is vaccination against the virus. Immunity to IBV has most often been assessed using serological assays; like enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).IBV (genus Gamacoronavirus, family Coronaviridae) contains a 27.6 kb single stranded positive sense RNA. The genome encodes three major structural proteins; the spike (S) glycoprotein, the integral membrane glycoprotein (M), and the 43 to 50 kDa nucleocapsid (N) phosphoprotein .The aim of this study was to prepare recombinant nucleocapsid protein. For this purpose after RNA extraction the corresponding gene with a length of 1227 bp was amplified by RT-PCR. Then this gene cloned into expression plasmid (pMAL-C2X) and recombinant plasmid was transferred to strain Rosetta of E.coli. Expression of protein N was detected by SDS-PAGE. The results of this study showNucleocapsid recombinant protein could be expression whit high concentration in bacterial system.