اثر مهاركننده تلومراز MST-312 بر آپوپتوز سلول هاي ميلومي U266

Investigation of telomerase inhibition effect on apoptosis of myeloma cell line U266

سابقه و هدف: تلومراز در اكثر سرطان هاي انساني و ميلوم مالتيپل بيان مي شود و با توجه به عدم بيان آن در سلول هاي سوماتيك، هدف قرار دادن آن يك رويكرد درماني موثر براي درمان سرطان مي باشد. هدف از مطالعه ،بررسي تاثير مهاركننده تلومراز MST-312 ،بر آپوپتوز سلول ميلومي U266 بود. مواد و روش ها: در يك مطالعه تجربي، سلول هاي U266 با دوزهاي مختلف MST-312 در زمان هاي مختلف تيمار شدند، سپس زنده ماني سلولي با آزمون دفع رنگ تريپان بلو، فعاليت متابوليك سلول با روش رنگ سنجي MTT و آپوپتوز سلولي به روش فلوسايتومتري با استفاده از اتصال به آنكسين-V /7AAD بررسي گرديد. آپوپتوز در سطح ژن نيز با بررسي بيان ژن هاي BAX و BCL2 بعد از تيمار سلول ها با دارو و استخراج RNA با Real time PCR انجام گرفت. يافته ها: بيش از 50% كاهش در زنده ماني سلول هاي تيمار شده در غلظت 8 ميكرومولار به مدت 48 ساعت مشاهده شد. فعاليت متابوليك سلول بعد از تيمار 48 ساعته با دوز هاي 2، 4 و 8 ميكرومولار MST-312 به ترتيب 25%، 46% و 62% كاهش يافت. تقريباً30 % افزايش آپوپتوز در سلول هاي U266 بعد از مواجهه 48 ساعته با 2 ميكرومولار MST-312 مشاهده شد. تيمار سلول هاي ميلومي با غلظت 2 ميكرومولارMST-312 به مدت 48 ساعت، باعث افزايش بيان ژن BAX و كاهش بيان ژن BCL2 گرديد. نتيجه گيري: تيمار كوتاه مدت سلول هاي سرطاني ميلومي با MST-312 باعث كاهش زنده ماني و فعاليت متابوليك و افزايش آپوپتوز سلولي مي شود. اين دارو با مهار تلومراز و القاي آپوپتوز در سلول هاي ميلومي مي تواند به عنوان كانديدي جهت درمان ميلوم مالتيپل پيشنهاد شود.

Background and Objectives: Telomerase-targeted therapy for cancer has received great attention because telomerase is expressed in almost all cancer cells but is inactive in most normal somatic cells. This study aimed to investigate the effects of telomerase inhibitor MST-312، a chemically modified derivative of epigallocatechin gallate (EGCG)، on apoptosis of myeloma cell line U266. Materials and Methods: In an Experimental study، U266 cells were treated with different concentrations of MST-312 at different times; then، cell viability by trypan blue exclusion assay، cell metabolic activity by MTT assay، and cell apoptosis by Annexin V Apoptosis Detection Kit were measured. To further investigate apoptosis، BAX and BCL2 gene expression of the treated cells was investigated by the quantitative Real-Time PCR. Results: MST-312 exerted a dose-dependent short-term cytotoxic effect on myeloma cells. Over 50% decrease in the viability of treated cells was seen in 8 μM concentration of MST-312 within 48 h. The cytotoxic effect of MST-312 was concentration-dependent، with approximately 25، 46، and 62% reduction in metabolic activity after 48 h exposure to 2، 4، and 8 μM of MST-312، respectively. Gene expression analysis showed downregulation of antiapoptotic gene Bcl-2 and upregulation of apoptopic gene BAX.