كشت بافت باله دمي تاسماهي ايراني Acipenser persicus

Caudal fin tissue culture of Persian sturgeon Acipenser persicus

در اين تحقيق رده هاي اوليه سلولي از طريق كشت تكه هاي باله دمي تاسماهي ايراني Acipenser persicus تهيه شد. حاشيه باله دمي يك عدد ماهي 2 ساله داراي طول 23 سانتيمتر و وزن 133 گرم به اندازه تقريباً 2 سانتيمتر بريده شد، سه بار با محلول PBS حاوي آنتي بيوتيك ها شستشو داده شد و سپس به تكه هاي تقريباً 1 ميلي متر بريده شد و در محيط كشت L-15 حاوي آنتي بيوتيك ها و 20 درصد سرم جنين گاو تحت دماي 22 درجه سانتيگراد كشت داده شد. پس از تشكيل مقدار كافي لايه سلولي بر روي كف فلاسك كشت، سلول ها با محلول PBS حاوي آنتي بيوتيك ها شستشو شدند و از طريق تيمار با Trypsin-EDTA (25/0 درصد) و تكان دادن فلاسك از كف فلاسك جدا شدند. پس از شستشوي سلول ها با محلول PBS حاوي آنتي بيوتيك ها آنها در 5 ميلي ليتر محيط كشت L-15 حاوي 20 درصد سرم جنين گاو، آنتي بيوتيك ها تحت دماي 22درجه سانتيگراد كشت داده شدند (ساب كالچر اول). پس از تشكيل مقداركافي لايه سلولي، مشابه همين مراحل براي ساب كالچر دوم انجام شد. در بين سلول هاي حاصل از كشت اوليه تكه هاي بافت، سلول هاي شبه فيبروبلاست و شبه اپي تليال مشاهده شد ولي پس از انجام ساب كالچر اول تعداد سلول هاي شبه فيبروبلاست بيشتر بود. در اين تحقيق توليد دو رده سلولي در نتيجه كشت اوليه و دو كشت مجدد (ساب كالچر) بررسي شد.

Primary cell lines were established from the culture of explants of caudal fin of Persian sturgeon, Acipenser persicus. The margin of the caudal fin from a two year old specimen (23 cm in length, and 133 g in weight) was aseptically cut (2 cm), washed three times with PBS containing antibiotics and then minced into 1mm explants and cultured in L-15 medium complemented with antibiotics and FBS (20%) at 22°C. After confluent monolayer formation on the bottom of the flask, the cells were washed with PBS containing antibiotics and dislodged by trypsin-EDTA solution (0.25%) and shaking the flask. After washing the cells with PBS containing the antibiotics, they were cultured in 5 ml of L-15 medium, FBS (20%), antibiotics at 22 °C (first subculture). After a confluent monolayer formation, a similar procedure was followed for the second subculture. The emerging cells from explants exhibited fibroblast-like and epitheliallike cells in primary culture but the fibroblast-like cells were seen to predominate after the first subculture. In the present study the establishment of cell lines from the original culture at two passages was investigated.