بررسي تغييرات پروتئين هاي غدد شيري زنبور عسل در سنين مختلف رشد به روش الكتروفورز ژل پلي اكريل آميد سديم دودسيل سولفات

Isolation, characterization and evaluation of protein changes in the milk glands of honey bee at different ages using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)

آنزيم هاي گوارشي آلفا گلوكزاكسيداز، آميلاز و گلوكزاكسيداز كه از مهم ترين پروتئين ها در غدد شيري زنبورهاي جستجوگر مي باشند به همراه سه پروتئين ديگر به عنوان پروتئين هاي اصلي براي ساخت ژله رويال، در زنبورهاي كارگر پرستار بيان مي شوند. با توجه به اين كه بيان متفاوت اين پروتئين ها در سنين مختلف، موجب پردازش ساختار عسل و توليد ژله رويال مي شود، هدف از اين پژوهش بررسي اين تغييرات در سنين مختلف بود. براي اين منظور استخراج پروتيئن هاي غدد شيري با چهار روش تريس، فسفات، تري كلرواسيداستيك و فنل بررسي و سپس با سه روش رنگ آميزي كوماسي بريليانت بلو آر 250، نيترات نقره و كوماسي بريليانت بلو جي 250 ارزيابي شد. پس از تعيين بهترين روش استخراج و رنگ-آميزي، پروتئين ها با روش برادفورد هم غلضت شدند و بيان آنها در پنج دوره سني تولد، 5، 10، 15 و 20 روزگي بررسي گرديد. نتايج نشان داد كه بالاترين ميزان بيان پروتئين هاي غدد شيري موثر در ژله رويال، مربوط به سن 10 روزگي و كمترين ميزان بيان پروتئين ها مربوط به 20 روزگي بود. بيش ترين ميزان بيان در پروتئين هاي موثر در توليد عسل در گلوكزاكسيداز و در 20 روزگي و كمترين ميزان بيان در پروتئين هاي بيان شده در پروتئين آميلاز و گلوكزاكسيداز در سنين تولد، 5 و 10 روزگي بود. همچنين بيشترين حجم بيان پروتئين هاي اصلي ژله رويال مربوط به سنين 5 و 10 روزگي بود. به نظر مي رسد كه تفاوت هاي زياد در نرخ بيان پروتئين ها در سنين مختلف، يكي از مهم ترين عوامل موثر در كيفيت و كميت عسل و ژله رويال در زنبور عسل باشد.

Alpha-glucose oxidase, amylase and glucose oxidase, as part of digestive enzymes are the most important proteins in the milk glands of forager bees and expressed with three other proteins as the main protein for the production of royal jelly in worker bees. According to expression of proteins in different ages, effect on production of honey and royal jelly, the aim of this study was to investigate these changes. The proteins extracted from milk glands with four methods of tris, phosphate, tri-chloro acetic acid and phenol and stained with three methods included Cumasi Brilliant Blue R-250, Brilliant Blue G- 50 and Silver nitrate. After determining the best method of extraction and staining, protein concentrations were be equal by Bradford method and their expressions were evaluated at five age period of birth, 5, 10, 15 and 20 days. The results showed that the highest protein expression involved in royal jelly of milk glands, corresponding to 10 days of age and the lowest protein expression was in 20 days. The highest expression level of proteins involved in honey production was in glucose oxidase, at 20 days and the lowest expression in amylase protein and glucose oxidase at the ages of birth, 5 and 10 days. Most of the major royal jelly protein expression was related to the ages of 5 and 10 days. The results show that there were large differences in the expression of these proteins in different ages that can affect the quality and quantity of honey and royal jelly.