اثر كلسيم بر فعال سازي ترموليزين توسط نمك كلريد سديم

The effect of calcium on the activation of thermolysin by salt

ترموليزين يك پروتئاز گرمادوست با كاربرد در صنعت به ويژه سنتز پپتيد بوده و از باكتري باسيلوس ترموپروتئوليتيكوس به دست مي آيد. مطالعات قبلي نشان داده است كه نمك كلريد سديم باعث فعال سازي آنزيم مي شود. ترموليزين داراي چهار يون كلسيم ساختاري مي باشد كه در پايداري آن در برابر دما حائز اهميت اند. در مطالعه حاضر، نقش كلسيم در فعال سازي آنزيم توسط نمك بررسي گرديد. فعاليت آنزيم در حضور سوبستراي FAGLA در حضور نمك كلريد سديم 2 مولار و در حضور و عدم حضور كلريد كلسيم 10 ميلي مولار بررسي شد. به علاوه، طيف سنجي دورنگ نمايي دوراني و فلورسانس به منظور درك تغييرات ساختاري ترموليزين در حضور نمك و حضور و عدم حضور كلريد كلسيم مورد مطالعه قرار گرفت. نتايج نشان داد كه ميزان فعاليت آنزيم در حضور FAGLA وكلريد كلسيم 10 ميلي مولار 2/5 برابر افزايش يافت. نتايج طيف سنجي دورنگ نمايي دوراني پيشنهاد نمود كه ساختار كلي ترموليزين طي فعال سازي نمك وابسته به كلسيم تغيير نكرده و مطالعات فلورسانس نشان داد كه جايگاه فعال تحت تاثيركلسيم دستخوش تغيير شده است. بنابر نتايج بدست آمده از مطالعه حاضر، اتصال يون هاي كلسيم مي تواند بر ميزان فعال سازي ترموليزين توسط نمك موثر مي باشد.

Thermolysin, obtained from bacillus thermoproteolyticus, is a thermophilic protease having application in peptide synthesis. Previous studies have revealed that salt activates the enzyme. Thermal stability of TLN is critically dependent on four calcium ions bound in N- and C-terminal domains. The aim of present study is unraveling the role of calcium ions in the salt activation of enzyme. In the presence of NaCl 2 M, measurement of the activity of enzyme in the absence and presence of CaCl2 10 mM using FAGLA as substrate was investigated. In addition, Far-UV circular dichroism and fluorescence spectroscopies were used to understand the calcium dependent changes in the enzyme structure. Results revealed the activation of enzyme using FAGLA and in the presence of CaCl2 10 mM increased 2.5 times. Far-UV circular dichroism spectra suggest that the overall structure of thermolysin has not changed during salt and calcium activation. However, fluorescence studies revealed that the active site has changed under calcium-dependent salt activation. According to the results of the present study, the binding of calcium ions might influence the activation of thermolysin by salt.